沙棘籽渣抗氧化物质提

发布时间：2020-05-06 20:47

【摘要】：沙棘(Hippophae rhamnoides L.)隶属胡颓子科沙棘属,是一种兼有食用、药用和生态价值的多年生落叶灌木或小乔木。沙棘的果实是沙棘价值的主要利用部位,含有丰富的营养物质和生物活性物质。目前沙棘果实主要用于沙棘果汁、沙棘籽油、沙棘果油的生产,其加工的主要副产物是果渣和籽渣。许多研究已表明,这些残渣中含有丰富的黄酮类、酚酸类、原花青素类等天然多酚类成分,而这些成分与沙棘的抗氧化、抗炎、抗菌和保护心血管等活性密切相关。因此合理利用加工副产物,构建工业固体废弃物资源利用的绿色模式,对促进沙棘的综合利用,延长产业链,具有积极的意义。为充分利用这一资源,本文以超临界CO_2萃取沙棘籽油后的沙棘籽渣为研究对象,在优化沙棘籽渣抗氧化物质的超声辅助低共熔溶剂提取及纯化工艺基础上,制备了具有强抗氧化活性和高原花青素含量的沙棘籽渣提取物。初步对沙棘籽渣富集物进行定性,并对其体外抗氧化活性以及对HepG2细胞免于受到H_2O_2损伤的保护作用进行了初步研究。主要研究结果如下:1.以DPPH清除率和FRAP值为考察指标,通过单因素试验和响应面试验分析,确定了超声辅助低共熔溶剂提取沙棘籽渣中抗氧化物质的最佳提取工艺条件为:氯化胆碱-草酸(摩尔比1:1,含水量30%)低共熔溶剂为提取溶剂,液固比14:1(mL/g),超声功率420W,超声时间52 min,超声温度44℃。在此条件下,提取液DPPH清除率和FRAP值分别为60.06±0.08%,63.86±0.13 mmol/L。2.利用紫外的方法测定了提取液中的主要活性成分的含量。结果显示,沙棘籽渣提取液中含有大量的原花青素(22.71 mg/gDW),多酚含量比较高(11.61 mg/gDW),含量均远高于黄酮含量(3.08 mg/100gDW)。并对抗氧化试验结果及总多酚、总黄酮、总原花青素含量进行了相关性分析,得出DPPH清除率和FRAP值与总多酚、总黄酮、总原花青素含量两两间均呈显著正相关系。3.在7种国产树脂中,HPD400大孔树脂表现出良好的沙棘籽原花青素吸附与解吸性能,是较好的富集纯化沙棘籽原花青素的树脂。HPD400树脂的优化动态吸附解吸条件为:提取液稀释4倍后上样,上样流速1 mL/min,吸附时间5 h;70%乙醇洗脱,洗脱体积2.5 BV。经过上述方法处理后,可得到原花青素含量为60.17±1.14%的褐色沙棘籽原花青素粉末。4.通过对纯化后的样品进行紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)和高效液相色谱(HPLC)分析,紫外方法分析表明沙棘籽渣中原花青素在270 nm处有特征吸收峰,且有酚类物质的性质;红外光谱证实了沙棘籽原花青素的基本骨架结构;经过高效液相色谱显示分析其中含有儿茶素和表儿茶素单体成分。5.利用DPPH、ABTS、铁还原法对沙棘籽原花青素的体外抗氧化能力进行测定,并以HepG2细胞建立H_2O_2损伤细胞模型来研究沙棘籽原花青素对氧化受损细胞的保护作用。结果发现:沙棘籽原花青素有较强的抗氧化能力,在较低浓度下便可具有较高的自由基清除能力和铁离子还原能力,DPPH自由基和ABTS自由基清除率的IC_(50)值分别为0.83 mg/mL,0.12 mg/mL,沙棘籽原花青素在质量浓度为1.5 mg/mL时的FRAP值为7.42 mmol/L。并且沙棘籽原花青素对HepG2细胞具有保护作用,能够使其较少受到H_2O_2的损伤作用。50μg/mL-400μg/mL的沙棘籽原花青素能够显著提高细胞的存活率,预处理浓度为200μg/mL时,细胞存活率达82.76%。荧光显微镜观察说明发生凋亡的细胞数量减少。综上所述,沙棘籽渣可作为一种经济的天然抗氧化剂的新来源。
【图文】：

取出冷却。在室温及 4o缩写C条件下，放置一周时间体系仍为均匀透明的液体如图2-1。表 2-2 不同类型的低共熔溶剂Table 2-2 Different types of deep eutectic solvents (DES)溶剂体系摩尔比季铵盐 氢供体DES-1 氯化胆碱 葡萄糖 1:1DES-2 氯化胆碱 苹果酸 1.5:1DES-3 氯化胆碱 草酸 1:1DES-4 氯化胆碱 丙三醇 1:2DES-5 氯化胆碱 乳酸 1:1图 2-1 不同类型的低共熔溶剂Figure 2-1 Different types of deep eutectic solvents (DES)

2 沙棘籽渣抗氧化提取及活性成分含量测定[70]。根据相似相溶原理，DES-3 和 DES-5 更易提取出极性较大的多也可能由于 DES-3 相对于其他低共熔溶剂的运动分散性好，能更好地，故在后续实验中，选择氯化胆碱-草酸（DES-3）低共熔溶剂为萃取参考文献报道[71, 72]，，比较了低共熔溶剂与有机溶剂（60%丙酮和 80%化能力的大小（亦见图 2-2），结果表明：低共熔溶剂 DES-3 提取液优于传统溶剂提取液。
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284

【参考文献】

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本文编号：2651836