燕窝酸抗阿尔茨海默症作用及机制研究

发布时间：2020-05-06 19:11

【摘要】：目的:研究燕窝酸小鼠单次给药毒性,对小鼠急性脑缺血的保护作用,活血化瘀作用及对D-半乳糖(D-gal)联合氯化铝(AlCl_3)致大鼠阿尔茨海默病(AD)的作用及机制,为燕窝酸用于AD临床治疗提供实验依据。方法:单次灌胃给药毒性试验,适应饲养环境3 d后,70只小鼠被随机分为7组:溶媒组和6个燕窝酸剂量组(6.0、7.2、8.7、10.4、12.5和15.0 g·kg~(-1)),每组5雌5雄。试验前禁食不禁水14~16 h,溶媒组小鼠按30 mL·kg~(-1)灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na),燕窝酸各剂量组按30 mL·kg~(-1)分别灌胃给予相应浓度的燕窝酸,观察和记录各组小鼠急性毒性反应,药后观察14 d。急性脑缺血损伤试验,适应饲养环境3 d后,100只小鼠被随机分为5组:溶媒组、尼莫地平组(18 mg·kg~(-1))和3个燕窝酸剂量组(28、55、110mg·kg~(-1)),每组10雌10雄。溶媒组小鼠按20 mL·kg~(-1)灌胃给予纯净水,尼莫地平组和燕窝酸各剂量组分别灌胃给予相应浓度的尼莫地平或燕窝酸,连续给药7 d。最后1次给药前禁食不禁水14~16 h,药后1 h,每组选取5雌5雄,采用断头术复制全脑缺血小鼠模型,记录张口次数(n)和喘息时间(s);每组剩余小鼠采用结扎双侧颈总动脉及迷走神经复制不完全缺血小鼠模型,记录小鼠存活时间(s)和生存时间延长率(%);解剖取材各组小鼠大肠和小肠,记录大肠和小肠水份含量。活血化瘀试验,适应饲养环境3 d后,50只小鼠被随机分为5组:溶媒组、阿司匹林组(18 mg·kg~(-1))和3个燕窝酸剂量组(28、55、110 mg·kg~(-1)),每组5雌5雄。溶媒组小鼠按20 mL·kg~(-1)灌胃给予纯净水,阿司匹林组和燕窝酸各剂量组分别灌胃给予相应浓度的阿司匹林或燕窝酸,连续给药30d。最后1次给药前禁食不禁水14~16 h,药后30 min,剪尾3 mm,记录剪尾出血时间(s),剪尾试验后,玻璃毛细管法和玻片法同时进行,采血测定并记录每只小鼠凝血时间(s)。对D-gal联合AlCl_3致AD大鼠的影响试验,适应饲养环境7 d后,66只雄性大鼠被随机分为6组:溶媒组、模型组、吡拉西坦组(504 mg·kg~(-1))和3个燕窝酸剂量组(19、38、76 mg·kg~(-1)),每组11只。每天上午,溶媒组大鼠按1 mL·kg~(-1)腹腔注射0.9%生理盐水和按10 mL·kg~(-1)灌胃给予纯净水,其余大鼠按1 mL·kg~(-1)腹腔注射D-gal(120 mg·kg~(-1))和按10 mL·kg~(-1)灌胃给予AlCl_3(15 mg·kg~(-1)),每天造模1次,连续处理16 w;每天下午,溶媒组和模型组大鼠按10 mL·kg~(-1)灌胃给予纯净水,吡拉西坦组和燕窝酸各剂量组分别灌胃给予相应浓度的吡拉西坦或燕窝酸,每天给药1次,连续给药16 w。D_(112),各组大鼠观察并记录出现白内障大鼠数目,并计算白内障形成率(%)。D_(113),每只大鼠训练自由泳90 s。D_(114)~D_(118),进行定向航行试验。直径10 cm的平台被置于水面1 cm以下,训练各组大鼠在水迷宫中寻找水下隐藏平台,连续训练5天,每天每只大鼠训练4次,如果某只大鼠超过90 s未能找到平台,应引导其到平台上,并站立10 s。记录每天4次训练逃避潜伏期(s),并计算均值。D_(119),进行空间探索试验。移除平台,记录首次穿越原平台时间(s)、原象限停留时间(s)、穿越原平台次数(n)和总路程(cm)。D_(120),采血,大脑和海马取材。生化检测血清白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、肌酐(CREA)、血尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)水平;大脑和海马的病理结构改变采用苏木精-伊红染色法(HE)检查。结果:单次灌胃给药毒性试验,溶媒组小鼠未观察到临床症状异常,无死亡。燕窝酸主要临床症状改变有:自发活动减少、安静怠动、俯卧、皮肤苍白、体凉等,死亡时间集中在20 min~5 h,燕窝酸LD_(50)=8823.07 mg·kg~(-1),95%可信限为8078.78~9625.18 mg·kg~(-1),LD_5=6832.20 mg·kg~(-1),LD_(95)=11394.07mg·kg~(-1)。急性脑缺血损伤试验,与溶媒组比较,经燕窝酸(28、55、110 mg·kg~(-1))连续灌胃给药7 d后,全脑缺血小鼠的张口时间和喘息时间显著增加(P0.01),喘息时间延长率分别为33.54%、35.98%、56.71%,不完全脑缺血小鼠生存时间显著延长(P0.01),生存时间延长率分别为41.24%、47.45%、94.35%,小肠、大肠水分含量显著增加(P0.01)。活血化瘀试验,与溶媒组相比,经燕窝酸(28、55、110 mg·kg~(-1))连续灌胃给药30 d后,小鼠断尾出血时间明显延长,出血时间延长率为26.24%、28.14%、29.28%;玻片法凝血时间显著延长(P0.05或P0.01),凝血时间延长率分别为21.48%、34.07%、42.22%;玻璃毛细管法凝血时间显著延长(P0.05),凝血时间延长率分别为27.74%、20.51%、32.90%。对D-gal联合AlCl_3致AD大鼠的影响试验,经燕窝酸(19、38、76mg·kg~(-1))连续灌胃给药16 w后,与模型组比较,白内障形成率明显降低,白内障形成率分别为40.0%、9.09%、0;体重增长显著增加(P0.05或P0.01);定向航行试验中逃避潜伏期明显缩短;空间探索试验中首次穿越原平台时间和总路程明显缩短,穿越原平台次数增加差距具有显著性(P0.05或P0.01),但原象限停留时间无明显差异(P0.05);血清肝功能指标ALB和TP水平明显升高,AST、ALT和TBIL水平显著降低(P0.05或P0.01);血清肾功能指标CREA和BUN水平显著降低(P0.05或P0.01);血清血脂指标TC和LDLC明显降低,但TG和HDLC水平无明显差异(P0.05);血清SOD水平明显增加,血清MDA水平显著降低(P0.01);血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P0.05或P0.01),TGF-β水平显著增加(P0.01);大脑和海马病理结构损伤得到明显减轻。结论:参照WHO毒性物质分类标准,燕窝酸属于低毒物质;燕窝酸有很好的抗急性脑缺血、增加肠道水份含量和活血化瘀作用;燕窝酸可有效改善D-gal联合AlCl_3致AD大鼠学习和记忆障碍,可能与降低炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),增强机体抗氧化能力,降低血脂水平,保护肝肾功能,保护大脑神经元等作用有关。
【图文】：

燕窝,灌胃给药,毒性试验,单次

图 1-1 燕窝酸对小鼠单次灌胃给药毒性试验存活动物数的影响Fig1-1 Effects of sialic acid on survival count of the mice in the single dose toxicity test2 体重与溶媒组比较，药后D1，6000~8657 mg·kg-1剂量组存活小鼠体重均降低（P＜0.05或P＜0.01），药后D4，6000~10398 mg·kg-1剂量组存活小重均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），药后D7及以后，各剂量组存活小重未见明显差异（P＞0.05），详见表1-2、图1-2。表 1-2 燕窝酸对小鼠单次灌胃给药毒性试验体重的影响（g）Table 1-2 Effects of sialic acid on body mass of the mice in single dose toxicity test (g)oupsg/kg)Body mass (n)D0D1D4D7D14ntrol 20.19±0.95(10) 21.73±1.14(10) 26.32±1.65(10) 27.76±1.94(10) 30.32±2.30

燕窝,脏器病理,肉眼检查

图 1-3 燕窝酸对脏器病理改变肉眼检查Fig 1-3 Effects of sialic acid on pathological changes of organs by visual examination燕窝酸LD50的结果经Bliss法计算，燕窝酸对KM小鼠单次灌胃给药LD5为 6832.20 mg5为11394.07 mg·kg-1，LD50为8823.07 mg·kg-1，95 %的可信限为80785.18 mg·kg-1，按世界卫生组织（WHO）的毒性分级标准认为属于质。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】