吴茱萸次碱对大鼠心室肌细胞离子通道的影响

发布时间：2020-05-08 07:47

【摘要】：目的:观察吴茱萸次碱(Rutaecarpine,Rut)对大鼠心室肌细胞的主要离子通道电流(INa、It。)及其Ⅰ-V曲线、激活动力学、失活动力学及失活后恢复动力学特征的影响。方法:采用Langendorff灌流装置,主动脉逆行酶解法分离大鼠心脏得到单个心室肌细胞;用含Rut的细胞外液灌流加药,以全细胞膜片钳技术记录给药前后细胞INa、Ito及其相关的动力学参数。结果:Ⅰ.Rut对INa通道影响1.在单刺激的状态下,抑制率随药物浓度增加而增加,其中10μM,20μM和40μM的1OμM、20μM和40μM浓度的Rut使峰值钠电流密度由(-32.53±5.12)pA/pF分别降为(-25.13±2.7)pA/pF、(-18.71±5.2)pA/pF 和(-14.71±5.2)pA/pF(P0.01,n= 10),Rut 对 INa峰值电流的抑制率分别为(22.37±2.42)%、(36.74±6.27)%和(47.67±4.52)%(n=10,P0.01)。2.对电流密度-电压曲线(Ⅰ-V)影响:浓度大于1OμM时,Rut可使INa的Ⅰ-V曲线明显上移,但Ⅰ-V曲线的形状、反转电位不改变,3.对激活曲线影响:10μM以上浓度Rut可使激活曲线显著右移,即朝着去极化方向移动,激活电压升高,激活难度增加。4.对失活曲线影响:Rut能使INa的失活曲线显著左移,即向超极化方向移动,10μM、20μM和40μMRut使V1/2由给药前的(-78.13±0.34)mV分别降低为(-94.22±1.32mV)、(-101.45±0.51)mV和(-112.56±0.72)mV(1n=10,P0.01),加快失活。5.对失活后恢复曲线影响.Rut能使INa的失活后恢复曲线显著右移,τ由给药前的(16.19±0.71)ms 变为(25.41 ± 1.11)ms、(32.34±0.76)ms 和(37.73±0.27)ms(P0.01,n=10),失活后恢复时程延长、复极化减慢。Ⅱ.Rut对Ito通道影响1.在单刺激的状态下,对Ito抑制率随药物浓度增加而增加。其中1OμM,20μM和40μM的Rut对Ito峰值电流的抑制率分别为(15.25±3.43)%、(33.45±6.58)%和(57.46±7.72)%(n=10,P0.01)。2.对电流密度-电压曲线(Ⅰ-V)影响:1OμM,20μM和40μM的Rut可使Ito的Ⅰ-V曲线明显下移,曲线形态保持一致。3.而就Ito的激活曲线而言:浓度为20μM和40μM时,激活曲线右移,半数激活电压(V1/2)由给药前的(14.45±0.96)mV分别增加为(27.69±4.35)mV和(28.89±3.74)mV(n=10,P0.01);给药前后半数激活电压变大,意味着同等条件下,通道更难被激活。4.对失活曲线影响:Rut能使失活曲线左移,即向超级化方向移动,给药20μM和40μMRut的半数最大失活电位(V1/2)由给药前的(-36.34±0.76)mV变为(-60.48±0.96)mV 和(-75.45±0.78)mV(n=10,P0.01),失活过程加速。5.对于失活后恢复曲线:Rut可使曲线右移,失活后再激活参数τ由给药前的(72.24±1.32)ms 增加至(98.85±0.81)ms 和(147.3±1.35)ms(n=10,P0.01),失活后恢复时程延长、复极化减慢。结论:吴茱萸次碱对大鼠心室肌INa和Ito具有不同程度的阻滞作用。
【图文】：

对照组,浓度依赖性,浓度,心室肌细胞

２．２邋Ｒｕｔ对大鼠心室肌细胞ＩＮａ的浓度依赖性影响逡逑刺激方案同２．１。采用累积加药法，观察给药１０ｍｉｎ后，不同浓度Ｒｕｔ邋（５、１０、２０、逡逑４０、８０、１６０邋ｐＭ）对心室肌细胞ＩＮａ的影响（见图２）。逡逑由图可见，当Ｒｕｔ浓度为５＾Ｍ时，其对ＩＮａ无明显作用，然而当浓度大于此值时，随逡逑着药物浓度增加，对电流的抑制作用随之增强，，表现出显著的浓度依赖性抑制现象。其中逡逑１０｜ａＭ，２０（ｉＭ邋和邋４０（ｉＭ邋的邋Ｒｕｔ邋对邋ＩＮａ邋峰值电流的抑制率分别为（２２．３７士２．４２邋）％、（邋３６．７４±６＿２７）％逡逑和（４７．６７±４．５２）邋％邋（ｎ＝１０，Ｐ＜０．０１）。当浓度为邋１６0ｎＭ邋时，ＩＮａ被抑制邋７０％－８０％。逡逑＜邋－ｉｏ逦■逦Ｓ：：：逦：：：：：逦：：：：：逦ＳＳ逡逑。逦■_L￥逡逑ｃ逦ｅＸｖ逡逑ｌ邋－３０－邋Ｈ邋：＇＾＇：逡逑＝３逦N逡逑ｏ逡逑■４０逦ｉ邋ｉ逦ｉ邋ｉ邋ｉ逦ｉ邋ｉ逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邋５逦１０逦２０逦４０逦８０逦１６０逡逑Ｄｒｕｇ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｊａＭ）逡逑图２不同浓度Ｒｕｔ对ＩＮａ的影响逡逑注：与对照组比较（加药前），＊＊Ｐ＜０．０１，ｎ＝ｌ０逡逑

曲线,曲线,对照组,心室肌细胞

２．３邋Ｒｕｔ对大鼠心室肌细胞ＩＮａ邋１－Ｖ曲线、激活曲线的影Ｐ向逡逑在电压钳模式下，保持电位－８０邋ｍＶ，给予－７０？＋４０邋ｍＶ、阶跃５邋ｍＶ、持续T间３０邋ｍｓ逡逑的方波串刺激，刺激频率0．５Ｈｚ，记录给药前后的ＩＮａ邋（见图３Ａ），以电流密度对相应的电逡逑压作图，绘制出ＩｊＪＫＨ－Ｖ曲线（见图３Ｂ）。ＩＮａ的激活曲线由Ｉ－Ｖ曲线的结果转化而来，标准逡逑化各电流幅值，以相对电导Ｇ／Ｇｍａｘ对各膜电位作图，米用Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ方程Ｇ／Ｇｍａｘ＝ｌ邋／｛１邋＋ｅｘｐ逡逑［（Ｖ１／２－Ｖ）／ｋ］｝进行拟合，得到稳态激活曲线（图３Ｃ）。逡逑由图可见，Ｒｕｔ可使１＆的Ｉ－Ｖ曲线显著上移，１0ｈＭ、２０｜ａＭ和４0ｎＭＲｕｔ使峰值钠电流逡逑（－３２．５３±５．１２）邋ｐＡ／ｐＦ分别降为（－２５．１３±２．７）邋ｐＡ／ｐＦ、（－１８．７１±５．２邋）ｐＡ／ｐＦ和（－１４．７１±５＿２邋）ｐＡ／ｐＦ逡逑（１１＝邋１０，邋Ｐ＜０．０１），但丨－Ｖ曲线的形状、激活电位、峰电位和反转电位不改变，但可使激活曲逡逑线显著右移。逡逑Ａ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦Ｗａｓｈ0Ｕｔ逡逑１０邋ｐ．Ｍ邋Ｒｕｔ逦２０邋）ｉＭ邋Ｒｕｔ逡逑Ｆ逡逑Ｗ逦＋５０ｍｖ｜—－－逡逑４０邋＾ｉＭ邋Ｒｕｔ逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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