人面子叶抗铜绿假单胞杆菌活性筛选及物质基础研究

发布时间：2020-05-08 19:22

【摘要】：目的本课题旨在筛选出人面子叶抗铜绿假单胞杆菌活性部位,并对其活性部位进行系统分离、纯化和鉴定,并将从活性部位分离得到的主要成分进行抗铜绿假单胞杆菌活性评价,为下一步人面子叶抗菌机制的研究以及研制控制皮肤感染药提供质量控制依据。方法首先,将人面子叶粉碎后,80%乙醇加热回流提取,采用系统溶剂法结合微量热法进行人面子叶抗铜绿假单胞杆菌活性部位筛选。其次,对筛选出的活性部位采用薄层色谱法、硅胶柱层析色谱法、MCI柱色谱法、ODS柱色谱法、凝胶柱色谱法(Sephadex LH-20)、半制备液相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)和重结晶等多种方法进行分离、纯化,运用质谱法(MS)、~1H NMR和~(13)C NMR波谱法等对所得到的化合物进行结构鉴定。最后,基于文献调研,采用微量量热法对所得主要化合物进行抗铜绿假单胞杆菌活性评价。结果本研究选筛选出人面子叶抗铜绿假单胞杆菌的活性部位为乙酸乙酯部位,其半数抑制浓度(IC_(50))为18.06μg/mL。通过对人面子叶乙酸乙酯部位采用多种色谱法进行分离、纯化和富集得到21个化合物,主要利用质谱和核磁等方法进行结构鉴定得到19个化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol)(1)、没食子酸(gallic acid)(2)、没食子酸酰甲酯(methyl gallate)(3)、没食子酸酰乙酯(ethyl gallate)(4)、(R)-六羟基联苯二甲酸甲酯(dimethyl(R)-hexahydroxy diphenoate)(5)、对-二没食子酸(p-digalloyl acid)(6)、间-二没食子酸(m-digalloyl acid)(7)、对二没食子酰甲酯(methyl-p-digallate)(8)、间二没食子酰甲酯(methyl-m-digallate)(9)、对-二没食子酰乙酯(ethyl-p-digallate)(10)、间二没食子酰乙酯(ethyl-m-digallate)(11)、木犀草素(luteolin)(12)、槲皮素(quercetin)(13)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-(14)、4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-8-[1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl]-(15)、柏木双黄酮(cupressuflavone)(16)、taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin(17)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-glucopyranoside)(18)、槲皮素3-O-β乳糖(quercetin 3-O-β-galactopyranoside)(19)。首次从人面子叶中分离得到的19个化合物中,黄酮衍生物化合物14和15为首次作为天然产物从分离得到,二氢双黄酮化合物17为新化合物,命名为taxifolin-(4`→O→3```)-4```-methoxy-taxifolin。对化合物儿茶素、表儿茶素、化合物12、化合物13、化合物18和化合物19进行抗铜绿假单胞杆菌活性评价,发现除儿茶素和表儿茶素外,其余4个化合物均对铜绿假单胞杆菌具有体外抗菌活性,从抗菌活性强度来看,化合物12最强,其抗铜绿假单胞杆菌活性次序为木犀草素槲皮素quercetin 3-O-β-glucopyranosidequercetin 3-O-β-galactopyranoside。结论通过对人面子叶活性部位(乙酸乙酯部位)的研究,主要得到酚酸和黄酮两大类物质,进一步厘清了人面子叶的化学物质基础。通过对主要化合物进行抗铜绿假单胞杆菌活性评价研究,确定了木犀草素(luteolin)(12)和槲皮素(quercetin)(13)及其糖苷化合物对铜绿假单胞杆菌有较强的体外抗菌活性,为下一步利用人面子叶深入研究及研制抗菌药物奠定基础。
【图文】：

铜绿假单胞杆菌正常生长代谢的产热曲线（37℃）

曲线,铜绿假单胞杆菌,生长代谢,不同部位

成都中医药大学硕士学位论文.2 人面子叶抗铜绿假单胞杆菌生长代谢的生物热活性指纹图谱37 ℃时，通过安瓿法测定人面子叶不同部位样品作用下铜绿假单胞杆菌生谢的生物热活性指纹图谱，即产热“功率-时间”（P-t）曲线，如图 2。从图以看出，当样品溶液加入到安瓿瓶中之后，细菌生长代谢的 D - E 段、第二的峰高及出峰时间呈现明显的规律性变化，随着受试样品浓度的增加，产热降低，与之对应，出峰时间延长，表明人面子叶不同部位均对铜绿假单胞杆生长代谢有影响，，甚者，细菌整个生长代谢的基本形状都发生变化或者几近。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

【参考文献】