黄芩素抗水痘—带状疱疹病毒感染的体外研究

发布时间：2020-05-08 17:41

【摘要】：目的:利用体外培养的人胚肺成纤维细胞(MRC-5),探究中药黄芩提取物黄芩素是否具有抗水痘-带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV)感染的作用。方法:首先制备VZV感染人胚肺成纤维细胞(MRC-5)模型,依据Read-Muench法计算TCID50,以确定VZV的毒力,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和细胞观察法确定实验药物黄芩素和阳性对照药阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)的最大无毒浓度TC_0和最小有效浓度MEC,以有效浓度为加药剂量,将实验分为四组:空白对照组、VZV接种组、VZV+药物黄芩素实验组、阳性对照阿昔洛韦组。在给药方式,细胞因子,病毒核酸,蛋白表达四个方面对黄芩素体外抗VZV作用进行评估。首先进行细胞形态学观察法对实验组细胞进行形态观察,分别通过先接毒后加药,药和毒同时加入两种给药途径进行接毒加药并连续观察五天,初步判断黄芩素对VZV是否具有抑制作用,与阳性对照ACV组、单独VZV组、空白对照组比较,观察不同组间细胞状态的差异;收集不同组细胞上清液,通过测定细胞因子IFN-β(β干扰素)、FGF(细胞生长因子)的浓度进行比较分析,根据不同组细胞的细胞因子浓度差异判断黄芩素以及阳性对照药物对VZV的抑制作用;通过实时荧光PCR(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法测定不同时间点各组细胞的病毒拷贝数,进行各实验组细胞病毒拷贝数差异比较分析;用蛋白质印迹法(Western blot)比较不同组VZV重要蛋白gE(glycoprotein E)的表达情况,对各组VZV gE测定的灰度值进行差异分析,综合分析以上各组实验结果,比较分析黄芩素是否具有体外抗VZV作用并对其效果进行评价。结果:黄芩素用药的最大无毒浓度和最小有效浓度分别100μg/ml和25μg/ml,黄芩素药物治疗指数与阿昔洛韦相同。通过细胞形态学观察发现黄芩素实验组、阳性对照阿昔洛韦组细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)约为20%,只接毒实验组细胞逐渐呈现皱缩状态并发生特征性葡萄串珠样病变,CPE约为80%;不同给药方式对VZV的抑制作用无明显差异。药物黄芩素组、阳性对照阿昔洛韦组所收集的细胞上清液中细胞因子IFN-β和FGF浓度接近,且分别高于VZV接种组细胞因子浓度;结果显示,VZV接种组DNA拷贝数与其他组相比增长迅速;VZV接种组细胞内的VZV gE含量高于黄芩素实验组以及阳性对照阿昔洛韦组。结论:黄芩素具有体外抗VZV感染人胚肺成纤维的作用,在细胞因子层面黄芩素与阿昔洛韦作用效果相似,在核酸和蛋白表达方面,阿昔洛韦作用效果略强于黄芩素。
【图文】：

图 1 不同给药方式对 MRC-5 形态影响观察可以看出，黄芩素在体外对 VZV 具有一定的抑制作用。两种不同给药途径对细胞病变程度影响差别不大。接毒加药后连续观察细胞五天，只接毒组细胞逐渐出现葡萄串珠样病变，，每孔 CPE 约有 80%；黄芩素实验组和 ACV 阳性对
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2654974