防治心肌缺血的赤芍萜苷组分代表性成分发现和生物药剂学性质表征

发布时间：2020-05-09 00:41

【摘要】：中药作为中医治疗疾病的主要载体,常以“膏丹丸散、片胶液针”等形式被患者使用。因此,中药制剂则是药材与临床应用的主要纽带,制剂原料便是疗效高低的溯源,而原料的理化性质却影响中药剂型的选择。作为中药制剂原料的基本单元,中药组分的整体性质表征是亟待解决的一个问题。本课题以赤芍萜苷为模型药物,辨识、发现防治心肌缺血的代表性成分,尝试对中药组分的整体生物药剂学性质进行表征。主要研究内容如下:1.赤芍萜苷组分防治心肌缺血代表性成分的辨识结合TCMSP数据库和文献查阅,利用UPLC-TOF/MS/MS对赤芍化学成分进行定性研究,再与心肌缺血的关键受体蛋白进行分子对接,发现Libdockscore分值大于平均值都为萜苷类成分,确证萜苷是赤芍防治心肌缺血的有效组分;对赤芍萜苷的入血成分进行分析,发现血浆中有芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和氧化芍药苷等原型成分;将赤芍提取物与H9C2心肌细胞共孵育后,被检出的亲和成分有芍药苷、芍药内酯苷和苯甲酰芍药苷,未发现其他帖苷类原型成分。通过辨识可知,赤芍萜苷组分的代表性成分可能是芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷和氧化芍药苷。2.赤芍萜苷组分防治心肌缺血代表性成分的发现利用HPLC对赤芍萜苷组分进行结构解析,芍药苷含量为33.82%,芍药内酯苷含量为21.14%,苯甲酰芍药苷含量1.91%;氧化芍药苷含量为3.51%。4个成分的量比关系为17.69/11.14/1.0/1.83,总质量占萜苷组分整体的60.38%。建立H9C2细胞缺氧损伤模型,遵循组分各萜苷成分的量比关系,通过配伍组合,以CK、LDH、AST、SOD、CAT、GSH-Px、MDA为评价指标,发现芍药苷+芍药内酯苷+苯甲酰芍药苷是赤芍萜苷防治心肌缺血的代表性成分。从细胞凋亡指数、凋亡相关蛋白Bax、Bc1-2、Caspase-3、细胞线粒体相关的Ndufa4、Ndufa8、Cox7a2、TFAMmRNA表达,进一步验证了芍药苷+芍药内酯苷+苯甲酿芍药苷具有维持线粒体功能、抑制细胞凋亡的作用。3.赤芍萜苷组分代表性成分的体内药效学研究和各成分药效贡献率评价利用ISO诱导大鼠心肌缺血模型,以心肌病理改变、超微结构变化、Tunnel凋亡指数、心肌酶水平(CK、LDH)、能量代谢(ATP、糖原)、凋亡蛋白(Caspase-3、Bax、Bc1-2)表达等多个方面,对赤芍萜苷与代表性成分的药效情况进行对比分析。结果表明,芍药苷+芍药内酯苷+苯甲酰芍药苷与赤芍萜苷组分(300 mg/kg)对于心肌缺血损伤具有一定的保护作用,且与萜苷组分在多个评价指标的调节上没有统计学差异。以动物体内药理效应为指标,利用多指标数据归一化加权法对3个代表性成分的药效贡献率进行了综合评价。结果发现,赤芍萜苷组分中各成分的药效贡献率分别为:芍药苷为54.87%,芍药内酯苷为32.46%,苯甲酰芍药苷为12.67%。4.赤芍萜苷组分的生物药剂学性质表征在单成分或组分体系下,测定各代表性成分的平衡溶解度、表观油水分配系数,并进行相似度评价和离散度分析。组分中苯甲酰芍药苷溶解度明显增加,其与芍药苷、芍药内酯苷的欧式距离分别为62.96和43.55,具有一定的相似性,油水分配系数的欧式距离却都在2200左右,差异较大,理论上应将赤芍萜苷分为Ⅰ/Ⅲ两个亚组分。考虑到I类成分的苯甲酰芍药苷不需要进行专属工艺研究,为了简化制剂方法,未进行亚组分的划分,仍将赤芍萜苷作为制剂原料的一个基本单元,并引入药效贡献率权重拟合表征组分的整体生物药剂学性质。结果发现,赤芍萜苷组分的平衡溶解度为36.09～38.39 mg·mL-1,油水分配系数1.52～1.63,Caco-2细胞的表观吸收渗透系数为1.68×10-6cm·s-1,表观吸收分泌系数为1.84×10-6cm·s-1,表明发现赤芍萜苷为高溶解性、低渗透性的中药组分。5.赤芍萜苷组分吸收促进剂的筛选及药动学研究采用大鼠离体外翻小肠吸收试验,以2 h的芍药苷累积渗透量为评价指标,筛选吸收促进剂的种类及用量,确定癸酸钠/赤芍萜苷(3:1)效果最好;测定赤芍萜苷(300mg/kg)灌胃给药后的大鼠体内药-时曲线,发现与癸酸钠合用时,芍药苷、芍药内酯苷AUC(0-24h)分别增加了36.33%和28.18%,当整合组分的药动学后,赤芍萜苷组分的AUC(0-24h)增加了35.27%,说明吸收促进剂的加入,可以提高赤芍萜苷组分的整体生物利用度。
【图文】：

图２．２赤芍１４个候选成分的三维结构逡逑Ｆｉｇ邋２．２邋Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋１４邋ｃａｎｄｉｄａｔｅ邋ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ逡逑２．１．３．２结果

防治心肌缺血的赤芍萜苷组分代表性成分发现和生物药剂学性质表征

图２．３含原配体的靶蛋白分子对接方法的验证逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】