二陈汤通过JNK信号通路干预非小细胞肺癌多药耐药的研究

发布时间：2020-05-09 00:50

【摘要】：研究背景:肺癌的发病率和死亡率居所有恶性肿瘤之首,其中非小细胞肺癌(N SCLC)占所有肺癌病理类型的80%。NSCLC的治疗手段以手术、放化疗、靶向治疗和免疫治疗为主。因NSCLC起病较为隐匿,多数患者确诊时已属晚期,而失去手术机会,生存期短,预后差。化疗是肺癌治疗的重要手段。但肺癌多药耐药(MDR)问题的出现,常导致化疗的失败,并使化疗临床疗效难以有更进一步提高。大量研究表明NSCLC多药耐药的发生与P-gp和MRP1蛋白的表达密切相关。P-gp和MRP蛋白是JNK信号通路中的关键蛋白,课题组前期实验发现二陈汤可抑制JNK通路的活性。因此我们提出“二陈汤是否通过JNK信号通路参与调控P-gp和MRP1蛋白的表达,从而达到逆转NSCLC多药耐药的作用”的假说。并拟通过MTT、免疫荧光和免疫蛋白印迹三种体外实验,初步探索二陈汤对人肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)的增殖抑制、及P-gp和MRP1蛋白表达情况的影响。为MDR发生机制及逆转剂的中医药研究提供参考数据,为临床应用二陈汤治疗NSCLC提供理论依据。研究目的:通过体外实验研究二陈汤对A549/DDP细胞增殖抑制及多药耐药相关蛋白P-gp、MRPI表达的影响,为临床应用二陈汤治疗NSCLC提供理论依据。研究方法:1.采用MTT法检测二陈汤及二陈汤+六味方、二陈精简方、二陈汤+益气养阴方,对A549/DDP细胞作用48小时后的生长抑制情况,并筛选出较优的药物及浓度作为下一步实验用药的依据。2.免疫荧光技术观察顺铂组、二陈汤组、二陈汤+顺铂组对A549/DDP细胞株形态学的影响及对P-gp蛋白表达的影响。3.免疫蛋白印迹(Western Blot)法检测顺铂组、二陈汤组、二陈汤+顺铂组对A549/DDP细胞株的影响及对P-gp、MRP1蛋白表达的影响研究结果:1.MTT实验结果显示:不同的二陈汤加减方在药物浓度为25.6mg/ml时对A549/DD P细胞株均有抑制作用,并且与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。二陈汤组(25.6mg/ml)与空白对照组相比,统计学有显著差异(P0.01)。其中二陈汤(25.6mg/ml)与顺铂(10ug/ml)组相比,差异有统计学意义(P0.05)。故选取浓度为25.6mg/ml二陈汤组完成进一步实验。2.免疫荧光技术显示:空白对照组和顺铂组的A549/DDP细胞株形态未发生变化,细胞质中P-gp蛋白分布较为紧密。而含有二陈汤组的A549/DDP细胞株可观察到细胞核萎缩,细胞质中P-gp蛋白的表达也较弱,荧光显示较为疏散。二陈汤+顺铂组中A549/DDP细胞株形态学改变更加明显。3.Western Blot检测结果显示:与空白对照组相比,二陈汤组中P-gp、MRP1蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。在P-gp蛋白表达量上:二陈汤+顺铂组与空白对照组比较,统计学有显著性差异(P0.01),与顺铂组相比较,差异也有统计学意义(P0.05)。MRP1蛋白表达量上:二陈汤+顺铂组与空白组相比较,统计学有显著差异(P0.01)。结论:1.不同的二陈汤加减方在药物浓度为25.6mg/ml时具有抑制A549/DDP细胞株增殖的作用。2.二陈汤具有一定逆转肿瘤细胞多药耐药的作用,其机制与通过JNK信号转导通路降低多药耐药相关蛋白P-gp及MRP1表达有关。
【图文】：

图１：用二陈汤（２５．６ｍｇ／ｍｌ），，ＤＤＰ邋（１０｜ｉｇ／ｍＬ）和联合组处理细胞４８小时
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2655311