椒目质量标准研究及椒目脂肪酸SFODLPME-GC测定方法的建立

发布时间：2020-05-09 03:32

【摘要】：目的:通过研究椒目的质量及其质量控制方法,制订有效评价椒目质量的山西省地方标准,为椒目药材质量控制提供科学依据;建立一种绿色、快速的样品前处理技术——漂浮有机液滴凝固液相微萃取(solidification of floating organic liquid-phase microextraction,SFODLPME)联合气相色谱(gas chromatography,GC)的测定方法,测定椒目中油酸、亚油酸、α-亚麻酸、棕榈酸及硬脂酸的含量,为多指标控制椒目质量提供一定的参考依据,也为中药脂肪酸的测定提供一种新的方法。方法:1.本课题采用常规的生药鉴别方法,查阅《中国植物志》、《中国高等植物图鉴》、《中药大辞典》等有关专著,对收集的10批椒目药材进行了基源鉴别、性状鉴别、显微鉴别及薄层鉴别,建立了椒目的定性鉴别方法。参照2010版《中国药典》(一部)附录和2015版《中国药典》第四部通则相关方法,对椒目药材进行常规的检查,包括杂质、水分、灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐及醇溶性浸出物,并制订椒目杂质、水分、灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物的限度。采用单因素实验,比较了索氏法与超声法提取脂肪油的提取率,考察了溶剂、料液比、提取时间,优化了提取脂肪油的工艺,建立了椒目脂肪油的最佳提取方法;优化了椒目脂肪酸甲酯化的条件;对色谱柱类型、柱温、检测器温度及进样口温度进行了考察,建立了α-亚麻酸的GC测定方法,测定了10批椒目中α-亚麻酸的含量;制订了脂肪油及α-亚麻酸含量的限度,建立了椒目的定量研究方法。2.对SFODLPME的各项参数进行优化,即有机溶剂的体积、盐浓度、搅拌速度、萃取时间、供相体积,筛选出最佳的微萃取条件,优化了色谱条件,建立sfodlpme gc的含量测定方法,同时测定椒目中油酸、亚油酸、α-亚麻酸、棕榈酸、硬脂酸的含量,并对sfodlpme-gc法与传统液液萃取(liquid-liquidextraction,lle)-gc法α-亚麻酸的测定结果进行了比较。结果:1.本课题组收集的10批椒目均为芸香科植物花椒zanthoxylumbungeanummaxim.的干燥成熟种子。卵圆形或类圆形,直径3~5mm,表面具黑色光泽,外皮常脱落,脱落后呈网状灰棕色或棕黑色纹理,富油性,气香,味辛辣,为其性状特征。以种皮表皮细胞、石细胞、内种皮细胞(下皮细胞)、胚乳细胞、油滴等为主要显微特征。采用硅胶g薄层板,以α-亚麻酸和椒目对照药材为对照,以环己烷-乙酸乙酯-乙酸(10:1:0.1)为展开剂,以1%硫酸香草醛溶液为显色剂,105℃显色后,在日光下检视,斑点清晰,重现性好。建立了椒目药材质量标准的性状鉴别项、显微鉴别项和薄层鉴别项。脂肪油提取工艺优选的条件为:采用超声提取法,以石油醚为溶剂,料液比为1:8,超声提取30min。α-亚麻酸甲酯化优选的条件为:0.5mol·l-1氢氧化钾甲醇溶液1ml,60℃水浴加热30min;14%三氟化硼甲醇溶液1ml,60℃水浴加热20min。建立椒目α-亚麻酸含量的gc测定方法:采用聚乙二醇20000(peg-20m)毛细管柱(30m×0.25mm,0.5μm),在柱温为190℃,检测器温度为250℃,进样口温度为250℃的条件下,α-亚麻酸得到较好的分离;含量测定方法学研究表明,α-亚麻酸在0.3046~12.1840mg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为y=0.4871x+0.0015,r=0.9999(n=6),平均回收率为100.65%。10批椒目药材样品的杂质含量1.08%~5.82%,含水量9.66%~11.55%,灰分含量5.13%~6.51%,酸不溶性灰分含量0.11%~0.56%,重金属均在百万分之十以下,砷盐均在百万分之二以下;以干燥品计,椒目中浸出物含量16.77%~24.80%,脂肪油含量19.82%~28.08%,α-亚麻酸含量4.06%~6.56%。按照中药质量标准限度制定原则,即最大(小)值±10%,提出了椒目质量标准中杂质含量不得过3%,水分含量不得过12.7%,总灰分含量不得过7.2%,酸不溶性灰分含量不得过0.6%;浸出物含量不得少于15.1%,脂肪油含量不得少于17.84%,α-亚麻酸含量不得少于3.65%。建立了椒目质量标准的检查项和含量测定项。建立了椒目药材的山西省地方标准(已审核)及标准草案。2.SFODLPME条件优化结果:萃取溶剂正十二醇体积20μL,盐浓度为10%,搅拌速度为700 r/min,萃取时间为20 min,供相体积为6.0 mL。建立了SFODLPME-GC的测定方法,采用聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.5μm),程序升温,起始温度170℃,以5℃/min速率升至190℃,保持10 min,再以5℃/min升温至210℃,保持10 min,进样口温度为250℃,FID检测器温度为250℃。含量测定方法学验证结果表明:油酸、亚油酸、α-亚麻酸、棕榈酸、硬脂酸依次在8.37~99.12μg·mL-1、8.60~135.84μg·mL-1、1.62~161.68μg·mL-1、10.17~160.64μg·m L-1、10.13~120.00μg·mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系,检出限1.2~1.6μg·mL-1;日内精密度RSD6.43%;日间精密度RSD9.61%;椒目五个脂肪酸的回收率在90.18%~109.14%。3批椒目药材的含量测定结果:油酸含量为4.31%~5.52%,亚油酸含量为3.32%~5.36%,α-亚麻酸含量为6.72%~7.81%,棕榈酸含量为2.20%~3.41%,硬脂酸含量为0.22%~0.23%。对SFODLPME-GC法与传统LLE-GC法的椒目α-亚麻酸的测定结果进行了统计学比较,按α=0.05水准,P0.05,表明两种方法没有显著性差异,SFODLPME-GC法可用于椒目脂肪酸的测定。结论:1.通过对10批不同产地的椒目药材进行了基源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、常规检查及含量测定等的研究,制订了椒目药材的山西省质量标准。该研究建立的方法具有良好的准确性、专属性和可行性,为椒目药材的质量控制和用药安全提供科学依据。2.SFODLPME GC法具有有机溶剂用量少,对待测组分的富集效果明显,且集分离、纯化、浓缩于一步的优点,可用于椒目脂肪酸的测定,且为多指标控制椒目质量提供参考依据,也为中药脂肪酸的测定提供一种新方法。
【图文】：

花椒原植物图

椒目质量标准研究及椒目脂肪酸SFODLPME-GC测定方法的建立

原植物腊叶标本图
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R282.5

【参考文献】