异银杏双黄酮在帕金森病体外和体内模型中的神经保护作用探究

发布时间：2020-05-09 16:55

【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease,PD)是继阿尔茨海默症之后世界上第二大神经退行性疾病。PD的主要病理特征是中脑黑质区多巴胺能神经元的死亡和缺失,黑质-纹状体多巴胺能系统功能退化,以及神经元内嗜酸性包涵体Lewy小体的形成。而PD的病因尚不清楚,现有的临床药物只能减弱、但不能根治帕金森病的症状,且副作用大。近年来,炎症和自由基假说的提出,为研发新药开辟新的方向。异银杏双黄酮是一种天然化合物,在中药银杏被首次发现,但含量较低,研究颇少。我们在前期的研究中发现,瑶族民间药物竹柏中含有较高的异银杏双黄酮,且在民间广泛应用于精神疾病的治疗。因此,本文主要探究异银杏双黄酮在帕金森体内体外模型上的作用,并研究其具体的作用机制,为天然药物在帕金森病的治疗上开辟新途径。实验方法:1.采用MPP~+诱导PD细胞模型:将细胞接种于96孔板,RA、TPA诱导分化为多巴胺能神经元表型,异银杏双黄酮干预24 h后,加入MPP~+刺激24 h,使用MTT法检测细胞活率;荧光分光光度计检测ROS的释放;qPCR法检测凋亡、抗氧化相关基因mRNA水平的变化;Western Blot检测凋亡、抗氧化以及神经营养因子蛋白水平的变化;免疫荧光检测原代神经元细胞突起长度的变化。2.采用MPTP诱导PD动物模型:应用行为学实验评估MPTP诱导的小鼠帕金森模型的建立;流式细胞仪检测小鼠外周血淋巴细胞亚型的表达以及腹腔巨噬细胞自噬能力的变化;ELISA试剂盒检测小鼠纹状体胶质细胞的激活情况;Western Blot检测小鼠纹状体PI3K/Akt/mTOR以及MAPK通路的表达变化。实验结果:1.细胞实验结果:MPP~+刺激诱导的SH-SY5Y细胞活率显著降低,而1μg/mL的异银杏双黄酮对其有显著改善作用(P0.05);MPP~+刺激的细胞ROS释放显著增强,异银杏双黄酮能够有效抑制ROS的释放(P0.01);qPCR、Western Blot检测凋亡Bax、Bcl-2、Caspase3(P0.01),氧化应激Nrf2、HO-1、SOD、NQO-1等相关基因及蛋白(P0.01),都表明MPP~+可以引起细胞凋亡以及氧化应激反应(P0.01),而异银杏双黄酮可以有效改善细胞凋亡,并激活机体抗氧化系统抵抗MPP~+引起的氧化应激反应;在免疫荧光中实验中也可以看出异银杏双黄酮对神经元细胞突起的损伤也有改善作用(P0.05)。2.动物实验结果:与MPTP诱导的帕金森模型组来说,异银杏双黄酮在小鼠爬杆、转棒及旷野的行为学实验中均有明显的改善作用(P0.01);在外周系统中,也可以减缓MPTP导致的腹腔巨噬细胞自噬功能紊乱以及中枢自噬相关蛋白表达异常(P0.05);异银杏双黄酮也会对MPTP引起的中枢神经胶质细胞的活化以及炎症因子的释放有抑制趋势。实验结论:1.MPP~+可以引起SH-SY5Y细胞活率的降低,ROS的释放增加,凋亡相关的基因与蛋白表达增高,激活细胞氧化应激反应,神经营养因子分泌减少等PD具有的反应,异银杏双黄酮有效地改善这些方面功能的异常,提示异银杏双黄酮通过调节机体抗氧化系统,增加神经营养因子分泌,最终调节凋亡相关基因蛋白的共同作用来改善MPP~+诱导的PD体外模型。2.异银杏双黄酮还可以改善MPTP诱导的小鼠帕金森运动功能障碍,通过调节中枢胶质细胞的激活和外周淋巴细胞浸润,以及外周和中枢自噬功能来改善帕金森症状。
【图文】：

酮一贯都有血管清道夫、抗癌勇士、天然免疫增强剂的美称，而榄抗肿瘤药物[63]。竹柏还含有丰富的功能成分，具有抗炎、抗氧化、瘤等多种药理作用。据表明[64]，在九种黄酮类化合物的筛选中得到穗花杉双黄酮、银银杏双黄酮等，均显示出对 β 淀粉样蛋白引起的氧化应激和细胞毒损伤表现出强烈的神经保护作用，表明他们治疗神经退行性疾病aki 等[66]发现 2,3-二氢穗花衫双黄酮和 2,3-二氢-6-甲基银杏黄素能显E-1[67, 68]。Thapa 等[69]通过比较单黄酮与双黄酮对 Aβ 诱导的毒性和作用，发现台湾杉双黄酮、2,8-双芹菜素、穗花衫双黄酮和苏曼双并特异性地抑制 Aβ 的毒性，，减少原纤维的形成[70]。体外试验还显示化合物可抑制 NF-κB 调控 TNF- 、IL-1β 的表达从而影响免疫系统73]研究发现从日本金银花中分离得到的金莲木双黄酮可下调 IκB ）活性，抑制 NF-κB 活化，发挥抗炎作用。研究均表明黄酮类天然产物具有治疗神经退行性疾病的潜力，提示在 PD 疾病中的治疗前景与研究潜力。

图 1-2 实验技术路线Fig. 1-2. Experimental route银杏双黄酮对 MPP+诱导的 SH-SY5Y 细胞的影响 材料与仪器.1 材料表 2-1 主要的实验试剂Table 2-1 Main experimental reagents名称 厂家M 培养基 Gbico 公司 培养基 Gbico 公司%胰酶 Gbico 公司血清 美国 Gbico 公司 Gbico 公司杏双黄酮 上海源叶生物科技有限公司P+美国 Sigma 公司
【学位授予单位】：广东海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 涂清波;孙云;许婷;林颖;吕志阳;盛晟;王俊;吴福安;;银杏双黄酮药理作用的研究进展[J];山东医药;2018年19期

2 潘苏华，林诞平;异银杏双黄酮对兔血小板聚集和纤维蛋白原含量的影响[J];安徽中医学院学报;1994年04期

3 潘苏华;曹守仪;帅建平;戴中林;;异银杏双黄酮抑制血栓形成作用的研究[J];江西医药;1990年02期

4 潘苏华;沈源;王丽珠;陆念祖;贾宁人;;异银杏双黄酮对缺氧大鼠的氧自由基清除作用[J];中药新药与临床药理;1993年02期

5 潘苏华;戴中林;帅建平;;异银杏双黄酮对血小板功能的影响[J];中药新药与临床药理;1992年02期

6 张江蓉;王一尘;;银杏叶制剂的临床应用新进展[J];上海医药;2010年08期

7 郎爽;闫艳韬;刘畅;杨锦;王子健;高增平;;紫萁贯众中流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选[J];中国现代中药;2019年11期

8 徐燕;张正竹;邹忠梅;;香附的化学成分研究[J];中国药学杂志;2010年11期

9 刘冷;;银杏双黄酮刺激3T3-L1脂细胞的脂肪分解[J];国外医药(植物药分册);2003年02期

10 方芳;;银杏双黄酮对大鼠脂肪组织cAMPPDE的抑制[J];国外医药(植物药分册);1999年05期

相关重要报纸文章 前1条

1 史秀丽 傅佳 李光武;防治缺血性心脑血管疾病 血小板靶向中药值得期待[N];中国医药报;2006年

相关硕士学位论文 前4条

1 李亚娟;异银杏双黄酮在帕金森病体外和体内模型中的神经保护作用探究[D];广东海洋大学;2019年

2 成芳;南方红豆杉针叶紫杉烷类化合物、黄酮和多糖含量测定方法及时节变化[D];新疆农业大学;2016年

3 窦圣姗;东北红豆杉枝叶抗肿瘤有效部位群及其化学研究[D];黑龙江中医药大学;2003年

4 崔文章;银杏总黄酮对急性心肌梗死模型大鼠的保护作用及机制[D];吉林大学;2008年

本文编号：2656447