人参皂苷CK抑制大鼠原发性肝癌生长的内质网应激作用机制

发布时间：2020-05-09 14:24

【摘要】：目的通过二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)间歇给药法建立大鼠原发性肝癌模型,探讨人参皂苷CK对大鼠原发性肝癌生长的抑制作用及内质网应激作用机制。方法选取54只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组9只,实验组45只。通过DEN间歇给药法建立大鼠原发性肝癌模型,实验组大鼠给予0.01%DEN溶液自由饮用,连续5 w;第6周开始,大鼠自由饮用无菌用水,连续2 w;第8周开始,大鼠继续给予0.01%DEN溶液自由饮用,连续6 w;第14周开始,大鼠再次自由饮用无菌用水,连续3 w。第16周末,实验组大鼠行PET-CT检测大鼠肝脏区域的肿瘤变化,并计算最大标准化摄取值(maximal standardized uptake value,SUV)。第17周开始,实验组大鼠随机分为模型组、人参皂苷CK低、中、高剂量组和阳性对照组,每组9只。人参皂苷CK低、中、高剂量组大鼠腹腔注射人参皂苷CK(2.5 mg/kg、5mg/kg、10mg/kg),阳性对照组腹腔注射5-Fu(5mg/kg),空白对照组、模型组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,每天1次,连续2 w。第18周末,实验组大鼠再次行PET-CT检测大鼠肝脏区域的肿瘤变化并计算SUV值。利用HE染色检测大鼠肝组织的形态学变化;采用TUNEL染色检测大鼠肝组织细胞凋亡;利用Western blot法检测大鼠肝癌组织中内质网应激相关蛋白GRP78、p-elF2α、p-JNK、CHOP、Cleaved caspase-12 和凋亡蛋白 Cleaved caspase-3 的表达。结果1.实验发现,模型组大鼠出现精神萎靡、少食、鼠毛无光等改变,解剖后可见,肝脏肿大、边缘顿挫,表面布有大小不一的灰白色结节并可见出血点;人参皂苷CK低、中、高剂量组、阳性对照组大鼠上述症状有所改善。2.PET-CT检测结果显示:给药前大鼠肝组织出现肿瘤区域;与给药前比较,人参皂苷CK给药后,大鼠肝组织肿瘤区域减小;给药后大鼠肝组织SUV值与给药前相比,差异显著,有统计学意义(P0.05或P0.01)。3.HE染色结果显示:模型组大鼠肝细胞出现异型性改变,肝板发生融合成团;人参皂苷CK低、中、高剂量组中出现坏死细胞,且随着人参皂苷剂量的增加坏死细胞的数量增加。4.TUNEL染色结果显示:模型组中可见少量阳性棕色深染的凋亡细胞,人参皂苷CK低、中、高剂量组中阳性棕色深染的凋亡细胞数量增多;与模型组比较,人参皂苷CK低、中、高剂量组有显著性差异,有统计学意义(P0.05)。5.Western blot检测内质网应激相关蛋白、凋亡蛋白表达结果显示:与模型组比较,人参皂苷CK给药后,内质网应激相关蛋白GRP78、p-e1F2α、p-JNK、CHOP、Cleaved caspase-12和细胞凋亡执行蛋白Cleaved caspase-3的表达差异显著,有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论人参皂苷CK可以抑制大鼠原发性肝癌的生长,其作用机制与激活内质网应激反应有关。
【图文】：

人参皂苷,化学结构式

延边大学硕士学位论文逡逑Ｋ）属于人参二醇型皂苷，它并不存在人参中，是通过人肠道细菌作用产生的一种降逡逑解物，具有保护肝脏、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性等点［２８］化学结构式如图１所示。逡逑与其他人参皂苷单体化合物相比，人参皂苷ＣＫ的抗肿瘤活性和增强免疫活性更强逡逑的，使人参皂苷ＣＫ在抗肿瘤研究备受国内、外学者的关注。逡逑Ｈ０逡逑ＨＯｖ＾ｖ，ＯＨ逡逑0人0人＾０Ｈ逡逑ｊ＼邋Ｈ逦ＭＷ：邋６２２．８７８逡逑Ｇｉｎｓｓｎｃｓｉｄｅ邋ｃｏｍｐｏｕｎｄ邋Ｋ逡逑图１．人参皂苷ＣＫ化学结构式逡逑１．３．１人参皂苷ＣＫ抑制癌细胞增殖，诱导细胞凋亡逡逑人参皂苷ＣＫ可以抑制癌细胞增殖并诱导细脾凋亡，包括肝癌、肺癌ｐ９］、结肠逡逑癌［３（）］、乳腺癌［３１］等，其中对肝癌作用效果显著。研究发现，人参皂苷ＣＫ人可以显逡逑著地抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的增殖，并诱导细胞凋亡［３２］；可以抑制人肝癌细逡逑胞ＨｅｐＧ－２增殖、迁移和侵袭

实验流程,人参,肝组织

ＰＥＴ－ＣＴ检测结束后，，各组大鼠给予２０％乌拉坦麻醉后处死，取出肝组织，观逡逑察肝组织形态与病理学变化，并拍照。将肝组织部分固定于１０％中性福尔马林，部逡逑分冻存－８０°Ｃ冰箱，已备后续实验使用。实验流程图如图２所示。逡逑逦！邋人参笔苷ＣＫ２．５ｍｇ／ｋｇ逡逑腹腔＿人参鸟苷ＣＫ邋５邋ｍｇ／ｋｇ逡逑疰射逦人参皂苷ＣＫ邋１０邋ｍｇ／ｋｇ逡逑逦邋逦邋５－Ｆｕ邋５邋ｍｇ／ｋｇ逡逑０．０１％邋ＤＥＮ逦０．０１％邋ＤＥＮ逦｜逦Ｌ邋逦逡逑丨肀邋Ｉ逦￣￣ｉ￣￣逦｜处死ｐ鼠逡逑ｖ逦｜逦＞＇逦、ｆ逦＼ｒ逦逦＾逡逑１邋ｗ逦６ｗ逦８ｗ逦１４ｗ逦１７ｗ逦１９ｗ逦〉逡逑ｉ邋＼逦＊邋＼逡逑ＰＥＴ－ＣＴ邋ＰＥＴ－ＣＴ逡逑图２．实验流程图逡逑３．邋２邋ＰＥＴ－ＣＴ邋检测逡逑８逡逑
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】