基于miR-146a、miR-155调控NF-κB信号通路探讨芍药甘草汤治疗颈型颈椎病兔炎症损伤的作用机制研究

发布时间：2020-05-10 07:22

【摘要】：目的:探讨芍药甘草汤对兔颈型颈椎病模型颈椎间盘和颈部肌组织形态学的改变情况、炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平的改变情况,以及颈椎间盘和颈部肌组织miR-146a/-155-NF-κB信号通路相关因子表达的影响,从而揭示芍药甘草汤的作用机制。方法:30只6月龄的新西兰大白兔用SPSS18.0软件操作程序分为5组,高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组、正常组,每组各6只。除正常组外的其余4组动物均参照张欣等无创兔颈型颈椎病动物模型的建立方法进行改进造模,并于8周后对5组动物分别进行相应干预。高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予高剂量、中剂量、低剂量芍药甘草汤灌胃治疗,每次每只兔子灌胃剂量80ml,每天早、晚各灌服1次;模型组和正常组不予干预,正常饲养。5组兔子均连续干预4周,干预结束后第二天五组兔子均耳缘静脉采血,离心取上清血清备用,采用ELISA检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。然后处死各组兔子取其颈后肌和椎间盘组织进行各项指标的检测:经过4%多聚甲醛固定、脱钙、石蜡包埋、切片,脱蜡入水后行HE染色,封片后行椎间盘和颈后肌组织形态学观察和各组间比较;Western blotting法检测椎间盘组织中信号通路关键节点MyD88、NF-κBP65的蛋白水平;RT-qPCR技术检测各组椎间盘组织中TLR4、TRAF-6、miR-146a、miR-155 和颈后肌组织中 miR-146a、miR-155 的表达情况。结果:1.椎间盘和颈后肌组织大体肉眼观察:与正常组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组均出现不同程度炎症损伤表现,且高剂量组、中剂量组、低剂量组炎症损伤程度比模型组轻。说明芍药甘草汤治疗颈型颈椎病是有效的。2.在组织形态学上,椎间盘和颈后肌组织退变程度均由轻至重依次是正常组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组。说明芍药甘草汤干预可以改善颈椎间盘和颈后肌组织炎症损伤程度,且呈剂量依赖性。3.血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平比较:干预前,模型组、高、中、低剂量组与正常组相比,各组间对照均具有显著性统计学意义(P0.01),而模型组、高、中、低剂量组之间进行比较均无差异性(P0.05),说明本次实验造模成功;干预后,高、中、低剂量组的表达水平均明显下降,且模型组与正常组相比有显著差异性(P0.01),模型组、高、中、低剂量组之间相比较,各组间对照均具有显著性统计学意义(P0.01),说明芍药甘草汤可以降低血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平,且呈剂量依赖性。4.椎间盘和颈后肌组织中MyD88、NF-κBP65蛋白表达水平比较:干预后,低、中、高剂量组的表达均降低,且模型组与正常组相比具有显著性统计学意义(P0.01),模型组、低、中、高剂量组之间相比,各组间对照也均具有统计学意义(P0.05)。说明芍药甘草汤可以降低椎间盘和颈后肌组织中MyD88、NF-κB P65的蛋白表达,且呈剂量依赖性。5.椎间盘和颈后肌组织中miR-146a、miR-155、TLR4、TRAF-6表达水平的比较:干预后,低、中、高剂量组miR-146a的表达水平均升高,miR-155、TLR4、TRAF-6的表达水平均降低,且模型组与正常组相比具有显著差异性(P0.01),模型组、低、中、高剂量组各指标之间进行比较,各组间对照也均具有差异性(P0.05)。说明芍药甘草汤可以升高椎间盘和颈后肌组织中miR-146a的表达,降低miR-155、TLR4、TRAF-6的表达,且均呈剂量依赖性。结论:1.高、中、低三种不同剂量的芍药甘草汤均对缓解兔颈型颈椎病的炎症损伤有效,且其效果呈剂量依赖性:高剂量组中剂量组低剂量组模型组。2.芍药甘草汤对兔颈型颈椎病的治疗作用机制之一可能是通过改变颈型颈椎病兔颈椎间盘和颈后肌组织中miR-146a、miR-155的表达而抑制NF-κB信号通路释放TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子,从而改善颈部炎症损伤,治疗颈型颈椎病。
【图文】：

低剂量,兔耳,后颈,症状

指下犹如拨琴弦感；至造模结束时，兔颈后肌肉变性，显现出明显条索状肌痉逡逑挛，甚至部分兔耳后颈部出现皮肤糜烂，有少量液体渗出等颈部症状，且从造模过程中逡逑至造模结束兔子体重逐渐下降，精神状态愈来愈差。见图２－１。干预过程中，高、中、逡逑低剂量组兔喷嚏、鼻涕症状渐消失，颈后肌痉挛和僵硬状况出现不同程度的缓解，拨动逡逑时指下组织阻力逐渐减小，部分兔耳后颈部的囊性突起逐渐减轻，而模型组均无明显变逡逑化；至干预结束时，各组兔颈后肌硬度减轻情况：高剂量组＞中剂量组＞低剂量组＞模逡逑型组，颈部突起减轻情况：高剂量组＞中剂量组＞低剂量组＞模型组。造模后整个干预逡逑过程顺利，没有兔子死亡，且无异常情况出现。逡逑ｉ邋ｉ逡逑图２－１模型兔造模过程中一般情况表现逡逑１８逡逑

炎症因子,血清

图１－１干预前（造模后）各组血清炎症因子ＴＮＦ－ｏｕ邋ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６表达逡逑２邋—般情况逡逑本实验以６月龄新西兰大白兔为实验对象，除正常组外的其余４组大白兔在造模过程逡逑中，，均出现不同程度流鼻涕、打喷嚏、颈后肌肉逐渐变得痉挛、僵硬，拨动部分兔颈后逡逑肌肉时，指下犹如拨琴弦感；至造模结束时，兔颈后肌肉变性，显现出明显条索状肌痉逡逑挛，甚至部分兔耳后颈部出现皮肤糜烂，有少量液体渗出等颈部症状，且从造模过程中逡逑至造模结束兔子体重逐渐下降，精神状态愈来愈差。见图２－１。干预过程中，高、中、逡逑低剂量组兔喷嚏、鼻涕症状渐消失，颈后肌痉挛和僵硬状况出现不同程度的缓解，拨动逡逑时指下组织阻力逐渐减小，部分兔耳后颈部的囊性突起逐渐减轻，而模型组均无明显变逡逑化；至干预结束时，各组兔颈后肌硬度减轻情况：高剂量组＞中剂量组＞低剂量组＞模逡逑型组，颈部突起减轻情况：高剂量组＞中剂量组＞低剂量组＞模型组。造模后整个干预逡逑
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】