研究芍药苷对活化的人T淋巴细胞的作用
发布时间：2020-05-13 13:32
【摘要】：湿疹(Eczema)是由多种内外因素引起的皮肤炎症,急性期皮损以丘疱疹为主,有渗出倾向,慢性期以苔藓样变为主,易反复发作。本课题组前期研究发现,中药复方茯苓汤对小鼠变应性接触性皮炎有显著抑制作用[1],临床上治疗湿疹,疗效较好且副作用小,优于传统抗组胺药[2]。利用超高速液相色谱-二极管阵列检测器-电喷雾-质谱(UFLC-DAD-ESI-MS)技术对复方茯苓汤整方成分进行了定性和定量分析,初步研究了其主要成分的体外药物代谢及抗炎作用,证实芍药苷(Paeoniflorin,PF)是复方茯苓汤的主要活性成分之一且具有较好的抗炎活性,相关研究也证实PF具有明确的抗变态反应及抗炎作用[3,4]。T淋巴细胞(T lymphocyte)是淋巴细胞的主要组分,是机体免疫识别、应答以及调控的主要细胞,在免疫系统中处于主导地位[5]。T淋巴细胞在湿疹发病中起着关键性作用,前期研究证实PF可抑制活化的T淋巴细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制IFN-y水平,PF治疗湿疹的抗炎机制需深入研究。NF-κB/MAPK信号通路作为经典的细胞信号转导通路,在诱导细胞促炎因子和抗炎因子的表达、聚集、激活和调节炎症反应等过程中发挥重要的作用。NF-κB是由RelA(P65)、Rel B、C-Rel、NF-κB2(P52)组成,其编码的产物由同源和各种异源的NF-κB/Rel蛋白二聚体构成,多为P50和P65,通过与其抑制蛋白IκB结合,参与下游信号转导通路,激活一系列激酶,从而调控相关基因表达[6]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是在真核细胞内广泛存在的一类丝/苏氨酸蛋白激酶,细胞外信号或刺激如炎性细胞因子、生长因子、细菌复合物等可以将MAPK信号通路激活,激活后可以将细胞外信号逐级放大传至细胞核内,调控基因表达[7]。MAPKs家族包括:ERK(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38MAPK、ERK3、JNK(Jun N-terminal kinase,JNK)、BMK1/ERK5、ERK27、ERK8和NLK等8个亚家族。各个通路受不同的刺激因素作用后,激活转录因子,介导生物学效应[8]。目的:研究PF对活化的人外周血T淋巴细胞NF-κB信号通路因子(NF-κB、IκB-α)、MAPK信号通路因子(JNK、ERK、p38)的影响,研究其抗炎机制。方法:对人外周血T淋巴细胞进行分离与体外培养,CD3联合CD28单抗活化T淋巴细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度PF对活化的T淋巴细胞NF-κB p65、IκB-α 磷酸化、磷酸化 p38(p-p38)、磷酸化 ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化 JNK(p-JNK)表达的影响。结果:1、PF抑制活化的T淋巴细胞NF-κB p65表达:在0-120min内,随时间延长,活化的T淋巴细胞中NF-κB p65表达增加。CD3+CD28组NF-κB p65含量显著高于空白对照组(P0.01),PF呈浓度依赖性抑制p65表达,其中1OμM PF组与CD3+CD28组比较能显著抑制NF-κBp65表达(P0.05)。2、PF抑制活化的T淋巴细胞NF-κB信号通路IκB-α磷酸化:在0-120min内,IκB-α的含量随时间的延长而减少,在60min时几乎完全降解。活化的T淋巴细胞中P-IκB-α含量高于空白对照组(P0.05),1μM PF、5μM PF与CD3+CD28组比较,能抑制T淋巴细胞P-IκB-α的表达(P0.01),1OμMPF组与CD3+CD28组比较,能显著抑制T淋巴细胞P-IκB-α的表达(P0.001)。3、PF对活化的T淋巴细胞MAPKs信号通路因子JNK、ERK磷酸化无影响:在0-120min内,JNK、ERK磷酸化在1Omin时表达最高。与CD3+CD28组比较,1μM PF、5μM PF、1OμM PF对MAPKs信号通路因子ERK、JNK的磷酸化表达无显著性差异(P0.05)。4、PF抑制活化的T淋巴细胞MAPKs信号通路因子p38磷酸化:在0-120min内,p38磷酸化在1Omin时表达最高。P-p38表达水平随着PF浓度增加而减少,5μM PF组与CD3 + CD28组比较,能够抑制T淋巴细胞P-p38的表达(P0.05),10μM PF组与CD3+CD28组比较,能显著降低T淋巴细胞P-p38的表达(P0.01)。结论:1、PF呈浓度依赖性抑制活化的T淋巴细胞中NF-κB p65表达及IκB-α磷酸化,提示PF可能通过NF-κB信号通路抑制T淋巴细胞活化。2、PF呈浓度依赖性抑制活化的T淋巴细胞中p38磷酸化,PF对活化的T淋巴细胞中JNK、ERK磷酸化无影响。3、NF-κB信号通路和p38磷酸化参与PF介导的对人T淋巴细胞的免疫抑制,表明PF作为重要的抗炎药物值得深入研究。
【图文】：
０－１２０ｍｉｎ内，ＣＤ３联合ＣＤ２８单抗活化的ＮＦ－ｋＢＰ６５表达水平随时间延长而增加。因逡逑此，，我们选择ＣＤ３联合ＣＤ２８单抗活化Ｔ淋巴细胞１２０ｍｉｎ来研究ＰＦ对ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５表达逡逑的影响（见图２，表１）。逡逑逦ＣＤ３＋ＣＤ２８逦逡逑０逦１０逦３０逦６０邋１２０ｍｉｎ逡逑ＮＰ－ＫＢＰyj_~栧义希穑幔悖簦礤义希。海蒎澹义希板危担板危保埃板危保担板义希裕椋恚澹ǎ恚椋睿╁义贤迹插澹茫模常茫模玻富罨模粤馨拖赴危疲耄洛澹穑叮档谋泶镥义媳恚卞澹茫模常茫模玻富罨模粤馨拖赴危疲椋悖拢穑叮档谋泶镥义襄巫榱恚。赍危希恚椋铄危欤希恚椋铄危常埃恚椋铄危叮埃恚椋铄危保玻埃恚礤义希校叮担穑幔悖簦椋睿掊宥戎靛澹埃玻
本文编号：2662036
【图文】：
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本文编号：2662036
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