人参发根抗氧化、抗皮肤癌及抗紫外线作用研究

发布时间：2020-05-15 07:54

【摘要】：癌症严重威胁人类健康,每3例确诊癌症病例中有1例是皮肤癌,全世界每年发生200多万例皮肤癌病例,其中恶性黑色素瘤的死亡率极高。紫外线的辐射是皮肤癌发生的重要因素之一。随着臭氧层的破坏,越来越多的紫外线到达地面,人体长期暴露在紫外光下尤其是中波紫外线(UVB),会引起皮肤衰老、DNA损伤、光老化甚至癌变。目前人参有效成分抗肿瘤、抗紫外线的研究已成为热点。但人参及其提取物中的重金属、农药和溶剂残留等会带来安全风险,人参生长过程缓慢且大面积占用森林土地,为解决伐林栽参、老参地问题,科研人员以人参茎叶为外植体诱导出人参发根,工厂化生产人参皂苷。人参发根研究多集中于发根诱导、培养条件优化、生产次生代谢产物。尚未发现人参发根抗黑色素瘤、抗紫外线的作用研究。所以本实验选择富含人参皂苷、多糖、氨基酸有效成分,而无农药、无重金属及质量稳定的人参发状根及其培养液为原料,首先,通过HPLC、苯酚-硫酸法,对其有效成分进行测定;其次,采用Cu~(2+)螯合能力、PPO、FRAP三种方法对人参发根进行抗氧化功效评价;再次,对人参发根的体外抗黑色素瘤活性进行研究;最后,依据功效评价结果,研制一款具有护肤作用的人参发根护肤液,对其抗紫外线功效、机理进行研究,以期为人参发根药理作用进一步研究及其应用,提供理论依据和参考。实验结果如下:1、人参发根抗氧化能力显著,随着浓度的增大,人参发根的Cu~(2+)螯合率逐渐接近VC,在100 mg/mL时人参发根的Cu~(2+)螯合率与VC差异不显著(P0.05);人参发根与VC有相同的酶活力清除趋势,40-100 mg/mL时两者差异不显著(P0.05);人参发根的总抗氧化能力在100 mg/mL时达到0.8774 mmol FeSO_4/g。2、人参发根抑制黑色素瘤A375细胞增殖(P0.05);抑制A375细胞中TYR的活性(P0.05);使细胞中黑色素生成减少;降低细胞迁移、侵袭能力;和对照组相比人参发根组、人参组及达卡巴嗪组均出现明显的凋亡细胞,人参发根组较人参组和达卡巴嗪组晚期凋亡率高(P0.05),其机理是将皮肤癌细胞的周期阻滞在S、G2/M期实现的。人参发根促进人皮肤角质层细胞HaCaT增殖,促进细胞划痕愈合,对HaCaT细胞起到保护作用效果强于人参(P0.05),达卡巴嗪因对HaCaT细胞产生细胞毒性作用进而抑制细胞增殖。3、人参发根护肤液的制备工艺:取90mL去离子水加入5mL甘油、5mL丙二醇搅拌均匀,加入0.1g透明质酸钠混匀后在高速搅拌下缓慢加入0.1g卡波姆,用10%氢氧化钠调节pH,作为基质,与人参发根醇提物配制成10 mg/mL的人参发根护肤液。4、人参发根提高了小鼠皮肤中Hyp含量、GSH-Px活性,降低MDA含量,增加CAT、SOD活力(P0.05);人参发根组小鼠皮肤中IL-6、TNF-α含量均减少,以人参发根高剂量组最好(P0.05);人参组、人参发根中、高剂量组有效改善UVB所致的小鼠皮肤损伤、脱屑现象,降低小鼠表皮层厚度,减少炎性浸润及角质层过度角化,保护胶原纤维;模型组小鼠皮肤中的MMP-1、MMP-3蛋白表达水平显著高于正常对照组(P0.05),人参组、人参发根低、中、高剂量组MMP-1、MMP-3蛋白表达水平显著下降(P0.05)。
【图文】：

Rb1 0.0105±0.0006Rg2 0.0029±0.0010Rc 0.0021±0.000320(R)-Rh1 0Rb2 0.0047±0.0008Rb3 0.0114±0.0110F1 0Rd 0.0070±0.0005Rk3 0F2 0.0040±0.0018Rh4 0.0075±0.0046Rg3 0原人参三醇 0Compound K 0.0073±0.0013Rg5 0Rh2 0原人参二醇 0.0153±0.0016加和值 0.1607±0.0110

18图 1.3 标准品、样品氨基酸含量色谱图Fig.1.3 HPLC chromatograms of 20 amino acid standard and the samples注：1-20 依次为：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、丝氨酸（Ser）、谷氨酰胺（G（Gly）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（T（Val）、甲硫氨酸（Met）、胱氨酸（Cys&Cys）和半胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙色氨酸（Trp）、赖氨酸（Lys）1.4 讨论人参主要通过有效成分人参皂苷、多糖、氨基酸发挥抗氧化、抗皮肤癌、护近年来人参的用途越来越广泛。但人参是多年生植物，我国多采用伐林栽参、大面积占用土地，为解决伐林栽参、老参地问题，科研人员用发根农杆菌从人参导出人参发根，对人参发根进行培养装置研究、培养条件优化。对人参发根进行养，，工厂化生产人参有效成分。对本实验室培养的人参发根及培养基中有效成分结果表明人参发根及其培养基中含有人参的主要有效成分。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2664711