核桃油中功能性脂类成分的分析研究及功效试验

发布时间：2020-05-15 20:31

【摘要】：核桃属胡桃科胡桃属植物,在我国种植历史悠久,分布广泛,是山东、河北、山西的重要经济作物,产量巨大。核桃中油脂含量高达60%-70%,核桃油富含不饱和脂肪酸及植物甾醇、维生素E等多种药理功效成分,具有提高记忆能力、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性。由于不饱和脂肪酸为核桃油中的主要功效成分,为研究不同制备方式对其含量及功效的影响,本文分别以冷榨法、水酶法、索氏提取法制备的核桃油为研究对象,进行了以下研究:首先以蒸发光散射检测器(ELSD)为检测器,研究建立了核桃油中脂肪酸的HPLC-ELSD分析方法,对色谱条件进行了优化,确定为:采用 Eclipse XDB-C18(4.6×150,5μm)色谱柱,甲醇/水(含 0.1%醋酸)(83:17,v/v)为流动相,柱温:30℃,流速:1 mL·min-1,蒸发光散射检测器温度70℃,N2载气流量为2.0mL·min-1,并进行了方法学验证,结果显示,该方法的线性关系、精密度、稳定性、重复性及回收率都较好。采用HPLC-MS方法鉴定了各脂肪酸的分子结构,确定了核桃油中脂肪酸成分种类。在上述方法的基础上,定量测定核桃油中脂肪酸含量,对核桃油样品的皂化条件进行了单因素考察,以总脂肪酸含量为考察指标,确定最佳皂化条件为:KOH-乙醇溶液浓度1.0mol·L-1,皂化时间40min,皂化温度70°℃。在最佳皂化条件下比较了三种不同方法制备的核桃油中各脂肪酸及总脂肪酸含量,结果显示,水酶法制备核桃油中总脂肪酸含量及不饱和脂肪酸含量均高于其他两种方法制备的核桃油。探索了核磁共振波谱法对核桃油中各脂肪酸含量的测定,并与HPLC法测定的含量进行了比较,无显著性差异,证实了该方法的可靠性。采用紫外检测器建立了核桃油中甘油三酯及脂类成分的HPLC-UV分析方法,确定色谱条件为:采用AgilentEclipse XDB-C18(4.6×250,5μm)色谱柱,乙腈:异丙醇:正已烷(66:20:14,v/v/v)为流动相,柱温:20℃,流速:0.8mL·min-1,检测波长210nm,在该条件下,各成分分离良好。对核桃油进行了红外光谱(IR)表征,根据IR谱图中各基团的特征吸收峰,初步确立了核桃油质量控制的红外图谱。最后采用Morris水迷宫及穿梭箱试验法,比较了水酶法及冷榨法制备核桃油对改善小鼠学习记忆能力的作用,以ICR小鼠为试验对象,连续灌服低、中、高剂量的水酶法提取核桃油及中剂量核桃油-β-环糊精微囊、中剂量冷榨核桃油4周后进行试验。Morris水迷宫结果显示,与空白对照组相比,水酶法提取核桃油低、高剂量组可明显缩短小鼠的逃避潜伏期(P0.05),且均低于阳性对照组,其垮台次数及在目标区域停留时间也高于空白组。穿梭箱实验结果表明,水酶法提取核桃油高剂量小鼠主动回避反应率均高于与空白组及其他样品组(P0.05),且被动回避反应时间缩短明显(P0.05)。说明水酶提取核桃油对小鼠学习记忆能力的改善优于冷榨法制备的核桃油。
【图文】：

核桃油,色谱图,载气流速,漂移管

蜥；Ｘ工夂大考硕士嗲依讼夂逡逑脂肪酸响应值有所下降，在载气流速为１．５Ｌ／ｍｉｎ时，存在基线漂移现象，故选逡逑择载气流速为２．０Ｌ／ｍｉｎ。逡逑２．４．１．４．２漂移管温度的考察逡逑在２．４．１．４．１色谱条件下选择载气流速２．０Ｌ／ｍｉｎ，分别考察漂移管温度５５°Ｃ、逡逑７０°Ｃ、８５°Ｃ时对分离效果的影响，结果表明，低的检测温度虽然有较大的灵敏度，，逡逑但是色谱峰分离效果不佳，高的检测温度存在基线漂移现象，因而选择７０°Ｃ作逡逑为蒸发光检测器分析检测温度。逡逑综合以上色谱条件的研究，最终选择ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ分析条件如下：色谱柱：逡逑ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃｉ８（４．６ｘｌ５０ｍｍ邋ｉ．ｄ．，５邋ｊｘｍ），柱温：３０°Ｃ；流动相：甲醇／水（含邋０．１％逡逑醋酸）（８３：１７，邋ｖ／ｖ）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；蒸发光散射检测器温度：７ＣＴＣ，载逡逑气（Ｎ２）流量：２．０Ｌ／ｍｉｎ，进样量５ｐＬ。该条件下测得的不同方法制备核桃油逡逑脂肪酸成分的结果如下图所示：逡逑ｍＶ邋■逡逑＾

标准曲线,核桃油,脂肪酸,质谱图

图２－２核桃油中各脂肪酸ＥＳＩ质谱图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋ＥＳＩ邋ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ｆａｔｔｙ邋ａｃｉｄｓ邋ｉｎ邋ｗａｌｎｕｔ邋ｏｉｌ逡逑从图２－２中可以看出，Ａ，邋Ｂ，邋Ｃ，邋Ｄ的分子离子峰分别为：２７７．２、２７９．２、逡逑２５５．３、２８１．３，由此可以判断其对应的脂肪酸分别为：亚麻酸、亚油酸、软脂酸、逡逑油酸。另外从图中发现，２［Ｍ－Ｈ］－处对应的离子峰丰度相对较高，主要是因为样逡逑品浓度太高，导致出现了二聚体准分子离子峰。ＨＰＬＣ－ＭＳ流动相体系中含有逡逑０．１％醋酸，在ＥＳＩ负离子源中ＣＨ３ＣＯＯＨ易电离失去一个Ｈ＋，与［Ｍ－Ｈ］？结合产逡逑生了新的离子［［Ｍ－Ｈ］－［ＣＨ３ＣＯＯＨ－Ｈ］］＿，因此在［Ｍ－Ｈ］＿＋５９处出现了相应的离子峰。逡逑根据ＨＰＬＣ－ＭＳ法定性分析了核桃油中脂肪酸成分，依次确定为亚麻酸、亚逡逑油酸、软脂酸、油酸，分别属于三不饱和、二不饱和、饱和、单不饱和脂肪酸，逡逑为脂肪酸的定量分析奠定基础。逡逑２．４．３核桃油中脂肪酸的定量分析逡逑２．４．３．１脂肪酸标准曲线逡逑在２．４．１获得的最优色谱条件下
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285;R284.1

【参考文献】