【摘要】：目的:通过临床观察及动物实验,来证明黄柏治疗下肢静脉性溃疡的有效性,进一步研究黄柏对下肢静脉性溃疡愈合中NF-κB、锌指蛋白A20表达的影响。方法:临床观察上,应用随机平均分组法,将48例下肢静脉性溃疡的患者分为治疗组与对照组以及空白组。治疗组在常规给予丹参川芎嗪注射液静脉滴注基础上,给予黄柏水煎液外敷溃疡处。对照组在常规给予丹参川芎嗪注射液静脉滴注基础上,给予复方黄柏液外敷。空白组给予丹参川芎嗪注射液静脉滴注基础上,给予生理盐水清创换药,不给于外敷药物。通过观察其溃疡表面色泽,创面肉芽组织,溃疡面积大小以及愈合时间的改变情况,来评判药物效果。实验研究上,创新建立了大鼠下肢静脉性溃疡模型。治疗组选择黄柏水煎液外敷大鼠创面,阳性药对照组选择复方黄柏液外敷。采用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平,应用RT-PCR法检测溃疡组织中NFκBp65、IκBα和TNFAIP3mRNA表达,以及WB法检测溃疡组织中NFκBp65、IκB和TNFAIP3蛋白的表达。结果:临床观察:黄柏水煎液外用治疗下肢静脉性溃疡16例,治愈5例,显效5例,进步1例,无效5例,总有效率为68.75%。对照组治疗下肢静脉性溃疡16例,治愈6例,显效4例,进步2例,无效4例,总有效率为75%。空白组治愈3例,显效4例,进步3例,无效6例,总有效率为62.5%。1.治疗组与空白组相比,总有效率有明显的差异(P0.05),证明黄柏水煎液治疗下肢静脉性溃疡有效。2.治疗组与对照组相比,总有效率有明显的差异(P0.05),证明复方黄柏液治疗效果优于黄柏水煎液。3.治疗组在溃疡表面色泽,创面肉芽组织,溃疡面积大小以及愈合时间的改变与空白组对比,均有明显差异(P0.05);治疗组在与对照组对比上,均无明显差异(P0.05)。动物实验:1.本实验创新建立了大鼠下肢静脉性溃疡模型。大鼠造模后陆续出现下肢肿胀、皮色暗红,溃疡创面有脓性分泌物渗出,食量减少、饮水减少、少动、弓背等症状。给药后对照组与治疗组症状缓解较空白组明显,对照组与治疗组比较无明显差异。2.HE染色光镜下的变化空白7天组:细胞呈梭形,组织细胞结构排列整齐,大小均匀。模型7天组:炎细胞大量出现,组织水肿明显,红细胞明显,组织细胞结构疏松。治疗7天组:组织水肿开始消退,炎细胞减少,结缔组织开始增生。对照7天组:组织水肿开始消退,炎细胞减少,结缔组织开始增生。模型14天组:正常细胞组织破坏明显,大量炎细胞增生,纤维结缔组织增生。治疗14天组:组织水肿消失,炎细胞减少明显几乎消失,结缔组织增生明显。对照14天组:水肿消失,炎细胞消失不见,结缔组织大量增生。3.取创面组织检测的IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,在模型成立后,模型组随着时间的推移,其含量增加明显。在治疗组与对照组中以上三者含量与模型组比较有显著的降低。治疗组与模型组比较得出,治疗组含量明显低于模型组,有显著性差异(P0.05)。治疗组与对照组比较,含量没有明显差异,P0.05,不具有统计学意义。4.通过PCR以及WB检测得出,随着模型成立后时间的延长,在模型组上,NF-κB mRNA阳性表达明显,IκBα、TNFAIP3/A20表达水平下降。在治疗组与对照组上,NF-KBmRNA水平下降,IκBα、TNFAIP3/A20的水平上调明显。治疗组与模型组比较,NF-κB表达降低明显,IκBα、TNFAIP3/A20表达量增高,有显著性差异(P0.05),具有统计学意义。治疗组与对照组比较,在NF-κB与TNFAIP3/A20表达上,两者不具有明显差异,P0.05,不具有统计学意义。而在检测IκBα表达时,在14天结果中通过统计学得出,对照组表达优于治疗组,P0.05,具有统计学意义。结论:临床观察:黄柏水煎液外用治疗下肢静脉性溃疡有效,其总效率为81.25%动物实验:1.本实验创新建立了大鼠下肢静脉性溃疡模型。2.通过测定IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及大鼠创面的变化情况,验证大鼠下肢静脉性溃疡模型的成功建立。进一步验证了黄柏水煎液通过降低IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,有效治疗下肢静脉性溃疡。3.TNFAIP3/A20是通过激活IκB,从而抑制NF-κB通路,降低了炎症反应,达到治疗下肢静脉性溃疡的目的,为临床治疗提供了新的思路与途径。4.黄柏水煎液可通过提高TNFAIP3/A20蛋白的表达,从而抑制NF-κB的表达而有效的治疗了大鼠下肢静脉性溃疡。5.黄柏水煎液与复方黄柏液对比发现,结果没有显著性差异(P0.05)。
【图文】：
IL-6标准曲线
TNF-a标准曲线
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.6
【参考文献】
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2665824
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