南药鸡骨草的生药学研究及抗肝纤维化活性评价

发布时间：2020-05-17 14:33

【摘要】：目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)等因素所致的肝损伤进一步发展会产生肝纤维化,而肝纤维化的控制与预防对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的治疗具有至关重要的作用。鸡骨草是豆科相思子属植物广州相思子(Abrus cantoniensis Hance,AC)的干燥全草,《中国药典》收载,具有利湿退黄、清热解毒、疏肝止痛的功效。临床上用于治疗肝硬化腹水、急慢性肝炎具有较好疗效。我们前期研究也证实鸡骨草具有抗肝纤维化作用。然而其物质基础及作用机制尚不清楚。为了科学地评价鸡骨草资源及质量,阐明其抗肝纤维化的物质基础,本课题对鸡骨草和毛鸡骨草进行生药学比较研究及其抗肝纤维化活性的系统评价,为鸡骨草的合理开发利用提供科学依据。方法:1、通过搜索中国植物志、中国数字植物标本馆、维普、万方、Pubmed等数据库,结合野外调查与市场调查,对鸡骨草的资源分布进行调查研究以及对其生药学特性进行研究。2、通过制作鸡骨草和毛鸡骨草茎和叶片的石蜡切片,用显微镜观察二者的组织构造区别。3、对鸡骨草和毛鸡骨草的挥发油和脂肪酸的成分进行比较。并对鸡骨草的乙酸乙酯和正丁醇部位进行LC-MS分析。4、应用Discovery Studio 3.0软件中的分子对接模块和ADMET(药物的吸收、分布、代谢、排泄和毒性)模块对相思子属的243个已知化合物进行活性预测和成药性评价。5、采用HSC-T6细胞筛选鸡骨草的抗肝纤维化活性成分;采用昆明小鼠(Kunming mice,KM)制作免疫性肝纤维化模型进行鸡骨草预防和治疗肝纤维化活性成分的体内筛选。结果:1、调查研究表明鸡骨草主要分布在我国广西和广东地区,湖南、海南和香港也有分布,喜高温,不耐寒,耐旱怕涝。2、通过鸡骨草与毛鸡骨草的形态鉴定和显微鉴定,基于其小叶、外形、株重以及次生木质部导管和叶片的栅栏组织特征,建立鸡骨草与毛鸡骨草的特征检索表,可对两者进行正确区分。3、通过比较鸡骨草和毛鸡骨草的挥发油成分,二者主要成分中除了(±)-α-乙酸松油酯(24.30%和20.07%)为共有成分外,鸡骨草药材中含量较高的丁香酚甲醚(22.22%)、茴香脑(14.08%)、邻乙酰苯酚(3.07%)、芍药醇(2.41%)等成分,在毛鸡骨草中都未检测出。而在毛鸡骨草药材中含量较高的α-乙基-己酸(25.84%)挥发油成分在鸡骨草中也并未检测出来。4、通过比较鸡骨草与毛鸡骨草脂肪酸的成分,二者共有成分为棕榈酸(27.12%和19.31%)、十八烷酸(5.22%和9.64%)、十五烷酸(0.22%和0.34%),此外,从主要成分来看鸡骨草中含有亚油酸(16.89%)和豆甾烷醇(1.68%),而毛鸡骨草中则含有豆甾醇(6.81%)和菜油甾醇(1.34%)。5、通过分析鸡骨草乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的lc-ms,分别鉴定出了36和26个化合物,其中乙酸乙酯萃取部位的主要成分为有机酸类和黄酮类,并存在许多其他类成分。而正丁醇萃取部位则存在四类成分(三萜皂苷类、黄酮类、生物碱类以及糖类)且都具有一定的药理活性。6、通过分子对接和admet预测,提示鸡骨草中的三萜皂苷类和有机酸类成分与肝病有关受体对接分数较高,且admet预测中具有较好的水溶性、较好的人体肠道吸收性、无肝毒性、无细胞色素p4502d6的抑制性、良好的血脑屏障通透性以及较低的血浆蛋白结合率,而生物碱的预测表明具有肝毒性、细胞色素p4502d6的抑制性以及较差的血脑屏障透通性,在开发研究时应注意。7、体外抗肝纤维化实验结果表明,鸡骨草石油醚萃取部位对hsc-t6细胞具有最佳的抑制作用(p0.001),抑制率达87%。8、体内牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,bsa)免疫性肝纤维化模型实验表明,鸡骨草正丁醇萃取部位和石油醚萃取部位分别对预防和治疗肝纤维化疾病具有较好的疗效,与模型组相比,二者均能明显地降低血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶的值,同时能显著性地降低肝组织中羟脯氨酸、单胺氧化酶、层黏蛋白、透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、转化生长因子β1的值(p0.05)。9、体外抗肝纤维化实验结果表明,亚油酸对hsc-t6细胞具有最佳的抑制作用(p0.001),抑制率达90%。结论:1、通过鸡骨草资源调查明确了鸡骨草资源主要分布在两广地区,主要的混淆品是毛鸡骨草、相思子、小叶三点金和小叶黑面神。2、通过鸡骨草和毛鸡骨草的形态鉴定和显微鉴定明确了鸡骨草和毛鸡骨草的形态差异和显微差异,为正确鉴别鸡骨草药材提供依据。3、通过鸡骨草各萃取部位的成分分析、化合物的虚拟筛选以及体内外实验明确了鸡骨草的石油醚萃取部位在治疗肝纤维化上具有显著作用(p0.05),而鸡骨草正丁醇部位则在预防肝纤维化过程中具有显著作用(P0.05)。并通过体外实验证实鸡骨草有机酸类成分的抗肝纤维化活性。
【图文】：

分布图,鸡骨草,药材,分布图

达到社会、经济及生态三者协调发展，为人类卫足量的中药材原料[22]。绍中药鸡骨草的资源调查，首先是介绍鸡骨草的进行调研研究，最后是对现在市场上鸡骨草的伪草的资源分布豆科相思子属植物广州相思子 Abrus cantoniensi品种。通过野外实地考察，国内主要标本馆及中国.org.cn/）标本查阅，结合文献调查可知，鸡骨草主南、海南、香港也有分布（图 1-1），广西主要分布分布在中部地区（图 1-3）[23]。该植物主要生长荒山坡地、草丛、林缘及稀林中。鸡骨草喜高温 20.9℃~22.4℃，年降雨量约 1202~2080mm[24]。

分布图,鸡骨草,药材,广西

鸡骨草主要分布在我国广西、广东地区，湖南、海南、香港也有分布（图 1-1），广西主要分布在其东南地区（图1-2），广东则主要分布在中部地区（图 1-3）[23]。该植物主要生长在海拔 200m 以下阳光充足的丘陵、荒山坡地、草丛、林缘及稀林中。鸡骨草喜高温，，不耐寒，耐旱怕涝，年均气温应达 20.9℃~22.4℃，年降雨量约 1202~2080mm[24]。图 1-1 鸡骨草药材在全国的分布图Fig. 1-1 national distribution ofAC注：红色区域鸡骨草植物分布较绿色区域密集
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;R285.5

【参考文献】