基于生物钟基因对炎症因子的调控研究生慧汤对阿尔茨海默病的干预作用

发布时间：2020-05-17 17:24

【摘要】：目的:查阅、整理昼夜节律、老年痴呆以及生慧汤的相关文献,结合本课题组的前期研究基础,探讨生物钟基因与炎症因子的相关性及生慧汤改善老年痴呆的作用机制。本课题以APP/PS1双转基因痴呆动物为模型,观察生慧汤对下丘脑生物钟基因及海马炎症因子的影响,通过理论探讨及实验研究两部分为生慧汤防治老年性痴呆提供理论基础和实验依据。方法:1、理论探讨:查阅老年痴呆与生慧汤的相关文献,对现有的理论基础及科学研究进行分析归纳总结,明确生慧汤的药效物质基础,分析生物钟基因与炎症因子的相关性,探讨生慧汤对老年痴呆的治疗机制。2、实验探讨:选用SPF级APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠,适应性喂养1w后按随机数表将其分组,分为模型组、褪黑素组、生慧汤高剂量组、生慧汤低剂量组、每组10只,灌胃给药4w后进行行为学检测,采用自主活动实验视频分析系统检测生慧汤对AD模型小鼠自主活动的影响,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力及空间记忆能力的影响。采用荧光定量PCR法检测各组小鼠下丘脑区生物钟基因Bmal1 mRNA表达的变化,观察生慧汤对生物钟基因Bmal1的影响。采用ELISA试剂盒检测各组小鼠海马区炎症因子IL-6、TNF-α蛋白含量,观察生慧汤对AD模型小鼠炎症因子IL-6、TNF-α的影响。采用Pearson分析方法分析下丘脑Bmal1基因与海马炎症因子IL-6、TNF-α的相关性。结果:1.Morris水迷宫结果:定位航行试验结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程显著延长(P0.01);与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高剂量组及生慧汤低剂量组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程明显减少(P0.05,P0.01)。空间探索试验结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠穿越平台次数与目标象限时间显著减少(P0.01),第一次抵原平台时间明显增加(P0.05),经过治疗后,与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高剂量组及生慧汤低剂量组小鼠穿越平台次数与目标象限时间明显增加(P0.05,P0.01),褪黑素组、生慧汤高剂量组及生慧汤低剂量组小鼠第一次抵原平台时间明显减少(P0.05,P0.01)。2.自主活动结果:与空白对照组比较,模型组小鼠活动次数和活动路程显著减少(P0.01);与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高剂量组小鼠活动次数和活动路程均显著增加(P0.05,P0.01),但生慧汤低剂量组无显著性差异。3.荧光定量PCR结果:与空白对照组比较,模型组小鼠Bmal1基因mRNA表达上调,经过治疗后,与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高剂量组和生慧汤低剂量组小鼠Bmal1基因mRNA表达均有不同程度的下调。4.ELISA试剂盒结果:与空白对照组比较,模型组小鼠IL-6、TNF-α含量明显升高(P0.01),经过治疗后,与模型组比较,褪黑素组、生慧汤高剂量组和生慧汤低剂量组IL-6、TNF-α含量均有不同程度的降低(P0.01)。5.Pearson相关性分析结果:将荧光定量PCR法测得Bmal1基因mRNA表达量的数据与ELISA试剂盒测得的炎症因子IL-6、TNF-α含量的数据进行Pearson相关性分析,海马区炎性因子IL-6、TNF-α含量与下丘脑区生物钟基因Bmal1含量呈现负相关关系,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.生慧汤可以改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的昼夜节律紊乱。2.生慧汤能改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的学习记忆能力和空间记忆能力。3.生慧汤可能是通过上调下丘脑Bmal1节律基因来改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠昼夜节律紊乱。4.生慧汤可能是通过降低海马中炎性因子IL-6、TNF-α含量来改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠学习记忆能力。5.海马区IL-6、TNF-α含量与下丘脑Bmal1基因具有相关性,且呈负相关关系。6.生慧汤改善AD的作用机制可能是通过上调Bmal1基因的表达,改善昼夜节律紊乱,从而降低炎症因子IL-6、TNF-α含量。
【图文】：

湖北中医药大学 2019 届硕士学位论文在于生物界的近日节律被定义为周期在 24h 左右的常机体的生命活动而言，其细胞分裂、体温、睡眠及生命活动均表现出近日节律。节律系统的组成，就哺乳动物而言，一般包括昼夜节枢系统及输出系统。作为昼夜节律中枢系统的视交叉smatic nueleus，SCN)位于视交叉上方，分为腹外侧 接受昼夜节律输入系统输入的光信号或非光信号后进调控核心体温、睡眠-觉醒以及一些激素分泌的节律，昼夜节律输出系统，如中枢振荡器、松果体(pineal g振荡器来调控昼夜节律周期。

图 1-1 生慧汤对 APP/PS1 双转基因 AD 模型小鼠自主活动的影响注：与模型组比较*P< 0.05，**P<0.01；与正常组比较##P<0.01。3.2Morris 水迷宫结果3.2.1 小鼠定位航行试验结果与空白对照组比较，模型组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程显著延长(P<0.01)；与模型组比较，褪黑素组、生慧汤高剂量组及生慧汤低剂量组小鼠上平台潜伏期与游泳总路程明显减少(P<0.05，P<0.01)（见表 1-2，图 1-2）。表1-2 生慧汤对APP/PS1双转基因AD模型小鼠定位航行试验的影响（x±s，n=10）组别 剂量/g·kg-1上平台潜伏期(s) 游泳总路程(cm)空白对照组 - 38.56±10.7 338.58±68.39模型组 - 65.11±14.7##893.01±58.29##
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2668914