二陈汤合桃红四物汤对ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠作用及机制研究

发布时间：2020-05-18 19:19

【摘要】：目的:通过观察Apo E基因敲除AS小鼠主动脉蛋白芯片变化以及二陈汤合桃红四物汤对Apo E基因敲除AS小鼠的干预作用,探讨二陈汤合桃红四物汤抗动脉粥样硬化的作用机制。材料与方法:20只C57BL/6J小鼠做空白对照组,给予普通小鼠维持饲料喂养,60只Apo E-/-小鼠做AS模型组,给予高脂饲料喂养进行动脉粥样硬化模型复制,8周后将60只模型小鼠随机分为模型组20只、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和阳性对照组各10只,模型组和各治疗组继续高脂饲料喂养4周,中药低、中、高剂量组分别给予含有生药量为0.72g/m L、1.44g/m L、2.89g/m L的中药煎剂灌胃,阳性对照组给予浓度为0.0078g/m L的血脂康胶囊水溶液灌胃,每次0.2m L,每日早晚各一次,正常组和模型组给予等体积蒸馏水进行灌胃。12周后,超声下观察正常组和模型组主动脉斑块形成情况,全自动生化分析仪检测各组小鼠血脂水平改变情况,HE染色和油红O染色观察各组小鼠主动脉病理形态学改变和脂质沉积情况,采用Elisa法检测各组小鼠血清TNF-α、IL-6、NO、ET-1水平,采用蛋白芯片技术分析模型组小鼠主动脉组织蛋白表达改变情况,筛选AS发病可能的机制,采用Western Blot技术和RT-PCR技术对筛选出的差异蛋白从蛋白水平或基因水平进行验证。结果:1.小动物超声结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠血管管腔变窄,血管内膜有较大面积斑块形成。2.血脂水平检测结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC水平、LDL水平、TG水平均显著升高(P0.01),HDL水平显著降低(P0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组以及阳性对照组TC水平、LDL水平、TG水平显著降低(P0.05或P0.01),HDL水平显著升高(P0.01)。3.HE染色结果提示,与空白对照组比较,模型组小鼠主动脉有较大斑块形成,与模型组比较,各治疗组斑块情况有不同程度改变,以中药高剂量和阳性对照组效果较佳。4.油红O染色结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠主动脉管腔内有大量脂质沉积。5.血清Elisa检测结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠血清TNF-α水平、IL-6水平、ET-1水平显著升高(P0.01),NO水平显著降低(P0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组以及阳性对照组TNF-α水平、IL-6水平、ET-1水平显著降低(P0.05或P0.01),NO水平显著升高(P0.05或P0.01),NO/ET-1显著升高(P0.05或P0.01);与阳性对照组比较,中药低、中剂量组TNF-α、IL-6、ET-1、NO/ET-1水平显著升高(P0.05或P0.01),NO水平显著降低(P0.01),中药高剂量组改变无统计学意义。6.蛋白芯片结果显示,与空白对照组比较,模型组蛋白表达上调共有59个,其中上调大于15%的有31个,上调大于20%有27个;蛋白表达下调的有72个,其中下调大于15%有27个,下调大于20%的有18个。筛选发现,TGFβ/PI3K/AKT/e NOS信号通路相关蛋白表达显著降低,TNF-α/NF-κB/HIF-1α信号通路相关蛋白表达显著升高。7.Western blot检测主动脉蛋白表达结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠主动脉TGF-β、PI3K蛋白表达水平和AKT、e NOS蛋白磷酸化水平显著降低(P0.01),Nox4和NF-κB蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组小鼠主动脉TGF-β、PI3K、Nox4、NF-κB蛋白表达水平和AKT、e NOS蛋白磷酸化水平有不同程度改善,以中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组(P0.05或P0.01)效果较为明显。8.RT-PCR检测主动脉m RNA表达结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠主动脉TGF-β、PI3K m RNA表达水平显著降低(P0.01),VEGF、MMP-9、HIF-1αm RNA表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组小鼠主动脉TGF-β、PI3K、VEGF、MMP-9、HIF-1αm RNA表达水平有不同程度改善,以中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组(P0.05或P0.01)效果较为明显。结论:1.Apo E-/-小鼠饲喂高脂饲料12周后主动脉蛋白表达谱发生明显改变。2.二陈汤合桃红四物汤能有效改善Apo E-/-动脉粥样硬化小鼠血脂水平、炎症反应,保护主动脉损伤。3.二陈汤合桃红四物汤保护Apo E-/-动脉粥样硬化小鼠主动脉损伤的机制可能与激活TGF-β/PI3K/AKT/e NOS信号通路相关蛋白表达有关。4.二陈汤合桃红四物汤保护Apo E-/-动脉粥样硬化小鼠主动脉损伤的机制可能与抑制TNF-α/Nox4/NF-κB/HIF-1α信号通路相关蛋白表达有关。
【图文】：

图 1 超声下 2 组小鼠血管内膜斑块形成情况C、TG、HDL 及 LDL 水平变化脂质水平检测结果显示，，与空白对照组比较，模型组小鼠血清 TC、升高（P<0.01），HDL 水平显著降低（P<0.01）。

图 2 两组小鼠血脂变化情况：1 空白对照组，2 模型组。与空白对照组比较，**P<0.01。 主动脉组织形态学变化小鼠主动脉 HE 染色结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠主动脉有明显
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2670202