宣通三焦、活血通络方对膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中CD2AP和Podocin的影响

发布时间：2020-05-19 15:22

【摘要】：目的:膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是以肾小球脏层上皮细胞下免疫复合物弥漫性沉积、肾小球基底膜增厚伴“钉突”形成为病理学特征的肾小球疾病,其中病因未明者称为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN),约占MN的2/3。MN临床主要表现为大量蛋白尿。本研究运用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)的方法,建立MN大鼠模型,并应用宣通三焦、活血通络方进行干预治疗,通过观察大鼠的一般情况、24小时尿蛋白定量(24 hours urine total protein,24h UTP)、血清总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(glycerin three greases,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等生化指标以及肾组织中CD2AP和Podocin的表达,探讨宣通三焦、活血通络方对MN大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中CD2AP和Podocin的影响,从而为防治MN提供实验基础和理论依据。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠40只,体重160±20g,普通饲料适应性喂养一周后测其尿蛋白均为阴性,采用完全随机法选取10只大鼠作为正常组(C组),30只大鼠为造模组。造模组大鼠预免疫一周后,开始正式免疫,隔日一次进行尾静脉注射C-BSA,连续四周,建立MN大鼠模型,C组大鼠尾静脉注射等量生理盐水。造模结束后留取造模组大鼠24小时尿液测定24h UTP,确定模型复制成功后,按体重随机将其分为模型组(M组)、中药组(Z组)和雷公藤多苷加醋酸泼尼松组(L组)。Z组和L组分别给予相应药物进行灌胃,C组和M组均以等量的生理盐水灌胃,各组连续给药四周。给药结束后,留取各组大鼠24小时尿液测定24h UTP,麻醉状态下股动脉取血测定TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr等生化指标,留取新鲜肾脏组织,应用免疫荧光、光镜、电镜观察大鼠肾组织的病理变化,免疫组化、Western-blot和Real-time PCR检测大鼠肾组织中CD2AP和Podocin蛋白及mRNA表达水平。结果:1大鼠的一般情况C组大鼠精神良好,活动正常,体毛有光泽、无脱落,进食、饮水正常,二便正常。各造模组大鼠出现不同程度的精神萎靡,抱团少动,体毛欠光泽、有脱落,进食减少,部分大鼠出现阴囊水肿。在造模过程中,造模组大鼠死亡三只,分析大鼠死亡原因可能是前期尾静脉注射的C-BSA溶液纯度不够,经改进过滤方法,大鼠未再出现死亡现象。给药结束后,Z组和L组大鼠一般情况较M组大鼠有所好转,M组大鼠一般情况未见明显变化。2 24hUTP给药结束后,各造模组24h UTP均较C组明显升高,有统计学意义(P0.05),Z组和L组24h UTP均较M组明显降低,有统计学意义(P0.05),Z组与L组24h UTP比较无明显差别,无统计学意义(P0.05)。3各组大鼠血液指标的检测结果(1)TP、ALB:给药结束后,各造模组TP、ALB均较C组明显降低,有统计学意义(P0.05);Z组和L组TP、ALB均较M组明显升高,有统计学意义(P0.05);Z组TP、ALB较L组TP、ALB明显升高,有统计学意义(P0.05)。(2)TC、TG:给药结束后,各造模组TC、TG均较C组明显升高,有统计学意义(P0.05);Z组和L组TC、TG均较M组明显降低,有统计学意义(P0.05);Z组TC、TG较L组TC、TG明显降低,有统计学意义(P0.05)。(3)BUN、Scr:给药结束后,各组BUN、Scr无明显变化,无统计学意义(P0.05)。4免疫荧光C组大鼠肾小球上无明显免疫复合物沉积;M组大鼠可见IgG沿肾小球毛细血管袢及系膜区弥漫性沉积;Z组和L组可见IgG沿肾小球毛细血管袢及系膜区少量沉积。5光镜C组大鼠肾小球结构无明显改变;M组大鼠肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚,“钉突”形成,系膜基质增多;Z组和L组大鼠肾小球毛细血管基底膜轻度增厚,少量“钉突”形成,系膜基质增多不明显。6电镜C组大鼠肾小球足细胞结构无明显变化;M组大鼠肾小球基底膜增厚,上皮下可见大量电子致密物沉积,足突弥漫融合或消失,有“钉突”形成;Z组和L组大鼠肾小球基底膜轻度增厚,上皮下有少量电子致密物沉积,足突部分融合。7免疫组织化学法CD2AP在C组大鼠肾小球上大量分布,少量表达在肾小管和集合管上,呈棕黄色染色;在M组大鼠肾小球上表达明显减少;与M组相比,CD2AP在Z组和L组大鼠肾小球上的表达明显增多。Podocin在C组大鼠肾小球上表达,在肾小管和间质上无明显表达,沿肾小球基底膜呈线性分布,呈棕黄色染色;在M组大鼠肾小球上表达明显减弱;与M组相比,Podocin在Z组和L组大鼠肾小球上的表达明显增强。8 Western blot与C组相比,各造模组大鼠肾组织中CD2AP的表达均明显减少,有统计学意义(P0.05);与M组相比,Z组和L组大鼠肾组织中CD2AP的表达明显增加,有统计学意义(P0.05);Z组大鼠肾组织中CD2AP的表达和L组大鼠肾组织中CD2AP的表达相比无明显差别,无统计学意义(P0.05)。与C组相比,各造模组大鼠肾组织中Podocin的表达均明显减少,有统计学意义(P0.05);与M组相比,Z组和L组大鼠肾组织中Podocin的表达明显增加,有统计学意义(P0.05);Z组大鼠肾组织中Podocin的表达和L组大鼠肾组织中Podocin的表达相比无明显差别,无统计学意义(P0.05)。9 Real-time PCR与C组相比,各造模组大鼠肾组织中CD2AP mRNA的表达均明显减少,有统计学意义(P0.05);与M组相比,Z组和L组大鼠肾组织中CD2AP mRNA的表达明显增加,有统计学意义(P0.05);Z组大鼠肾组织中CD2AP mRNA的表达和L组大鼠肾组织中CD2AP mRNA的表达相比无明显差别,无统计学意义(P0.05)。与C组相比,各造模组大鼠肾组织中Podocin mRNA的表达均明显减少,有统计学意义(P0.05);与M组相比,Z组和L组大鼠肾组织中Podocin mRNA的表达明显增加,有统计学意义(P0.05);Z组大鼠肾组织中Podocin mRNA的表达和L组大鼠肾组织中Podocin mRNA的表达相比无明显差别,无统计学意义(P0.05)。结论:1宣通三焦、活血通络方能够有效地改善MN大鼠的一般情况,显著降低MN大鼠24h UTP水平,同时还可以调节脂代谢,升高血浆蛋白。2宣通三焦、活血通络方能够有效地抑制或减少MN大鼠肾小球基底膜免疫复合物的沉积,减轻MN大鼠肾组织病理学改变,延缓肾损害。3宣通三焦、活血通络方能够有效地上调MN大鼠肾组织中CD2AP蛋白及mRNA与Podocin蛋白及mRNA的表达水平,对维持足细胞SD结构和功能的完整性起到了保护作用,这可能是宣通三焦、活血通络方抑制蛋白尿的作用机制之一。
【图文】：

27图 2 各组大鼠 TP、ALB 比较Fig.2 Comparison of TP andALB of rats in different groups (x±S)Note:*P < 0.05 vs C group;#P < 0.05 vs M group;△P < 0.05 vs L group.

图 1 各组大鼠 24hUTP 比较Fig.1 Comparison of 24h UTP of rats in different groups (x±S)Note:*P < 0.05 vs C group;#P < 0.05 vs M group.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】