从线粒体介导途径探讨黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的影响

发布时间：2020-05-20 02:42

【摘要】：目的:通过观察黄芪多糖及联合顺铂对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、线粒体凋亡相关蛋白Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP及线粒体超微结构的影响,从线粒体介导途径探讨黄芪多糖抑瘤、抗瘤的机制。方法:90只C57BL/6J小鼠,随机分为9组,正常组、模型组、APS低、中、高剂量组、DDP组、APS联合DDP低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余80只均接种LLC(1×10~7mL)于右前肢腋窝皮下,造模为荷瘤小鼠。造模次日起,治疗组的小鼠给予腹腔注射0.3mL药物。DDP每周注射1次,其余药物每天1次,正常组和模型组注射等体积生理盐水,治疗连续20d,并于第21天处死。观察指标(1)各组小鼠的一般情况;(2)体质量及瘤重;(3)HE染色观察移植瘤小鼠肺组织、肿瘤组织病理学变化;(4)免疫组化法检测移植瘤细胞中的Caspase 3、Cyt C、Omi/HtrA2、Smac/Diablo、XIAP的表达;(5)Western blot检测移植瘤细胞中的Caspase 3及Smac/Diablo蛋白的表达;(6)透射电镜观察肿瘤组织线粒体超微结构变化。结果:(1)与模型组相比,DDP组小鼠的体质量下降明显,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/mL APS组的荷瘤小鼠肿瘤质量减轻显著,差异有统计学意义(P0.05);与DDP组相比,3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/m L APS的荷瘤小鼠肿瘤质量减轻,差异有统计学意义(P0.05)。(2)肺组织HE显示:正常组肺组织结构完整;模型组的肺泡结构消失,肺充血严重;DDP组肺泡结构较为完整;3 mg/kg DDP联合(100、200)μg/mL APS组肺组织形态结构较为完整,肺局部充血,肺泡隔增厚。肿瘤组织HE显示:模型组的肿瘤细胞核大,肿瘤细胞染色深,周围没有坏死;DDP组的肿瘤细胞染色深,肿瘤细胞大片坏死和核固缩,碎裂;200μg/m L APS组联合3 mg/kg DDP组可见细胞坏死和核碎裂,固缩。(3)免疫组化表明:与模型组相比,各治疗组的肿瘤组织中Caspase 3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2蛋白表达显著升高,与DDP组相比,DDP、3 mg/kg联合DDP200μg/mL APS组表达最明显,差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。XIAP蛋白在模型组中呈阳性高表达;DDP及3 mg/kg DDP联合200μg/mL APS组的XIAP蛋白呈阴性表达,与模型组组比,差异均具有统计学意义(P0.05或P0.01)。(4)Western blot检测提示,与模型组相比治疗组Caspase 3、Smac/Diablo均有表达,其中DDP、200μg/mL APS联合3 mg/kg DDP组Caspase 3、Smac/Diablo表达显著增强。(5)电镜下观察线粒体形态的变化:模型组:肿瘤细胞线粒体结构清晰,可见线粒体嵴样结构,无肿胀、固缩,排列整齐,膜外形基本完整,线粒体密集,无线粒体空泡化结构。细胞核染色质分布均匀,核大,胞浆少;APS(50、100、200)μg/mL组:肿瘤细胞核染色质聚集,核大,胞浆少,胞浆内线粒体肿胀;DDP组:胞浆内线粒体肿胀,线粒体排列紊乱,膜模糊不清,嵴样结构错乱并消失,线粒体疏松溶解,线粒体内可见空泡形成;3 mg/kg DDP联合200μg/m L APS组:电镜下观察到线粒体的数目增加,细胞核染色质发生聚集,部分细胞出现凋亡,核大,胞浆少,胞浆内线粒体肿胀,线粒体固缩,嵴样结构错乱并消失,膜模糊不清,部分膜发生破裂,线粒体疏松溶解,线粒体内可见空泡形成。结论:APS及联合化疗药物DDP对小鼠移植瘤具有一定的抑制作用;APS及联合化疗药物DDP抑制小鼠移植瘤生长的机制可能与提高线粒体凋亡途径相关蛋白Caspase3、Cyt C、Smac/Diablo、Omi/HtrA2的表达,降低蛋白XIAP的表达有关。
【图文】：

癌病,非小细胞肺癌,脏腑,中医

图 1 线粒体途径凋亡信号转导途径小细胞肺癌属于中医癌病范畴，目前中医学者普遍认为癌病发生的主要病理基内虚，脏腑阴阳气血失调。而中医素有“久病多虚”“久病致虚”之论。经研究证非小细胞肺癌的发展过程中，随病情进展，正气逐渐衰弱，在治疗中应注意扶]。黄芪归肺、脾经，既可补本脏之气，又可兼补其母脏，因此在非小细胞肺癌运用颇多。黄芪首载于《神农本草经》，味甘，性微温，归脾、肺经，为补气有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生精养血、行滞通痹、脱毒排脓、敛疮生[69]。黄芪多糖是其最重要的天然有效活性成分，研究指出，，多糖（polysaccharid富含醛基或酮基的天然高分子聚合物，由10个以上的单糖通过糖苷键连接而成实验证实，含醛基或酮基的化学治疗是应用于恶性肿瘤全身治疗的主要方法大部分抗肿瘤化学药物在杀死肿瘤细胞的同时，也严重损伤了正常细胞。而近究发现，多糖具有显著的抗肿瘤活性并且对人体的毒副作用相对较小，对多糖性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点，现已应用于临床的有

处理组,移植瘤,瘤重,体质量

从线粒体介导途径探讨黄芪多糖联合顺铂对小鼠 Lewis 肺癌移植瘤生长的影响A 为模型组，B 为 50 μg/mLAPS 处理组，C 为 100 μg/mLAPS 处理组，D 为 200 μg/mLAPS处理组，E 为 6 mg/kg DDP 处理组，F 为 3 mg/kg DDP 联合 50 μg/mLAPS 处理组，G 为 3 mg/kgDDP 联合 100 μg/mLAPS 处理组，H 为 3 mg/kg DDP 联合 200 μg/mLAPS 处理组。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】