大鼠肢体缺血—再灌注损伤骨骼肌中Wnt-5a、PKC的表达变化研究及桃红四物液的干预作用

发布时间：2020-05-20 01:40

【摘要】：目的:研究大鼠肢体-缺血再灌注损伤(LI-RI)过程中骨骼肌组织中Wnt-5a、蛋白激酶C(protein kinase C PKC)的表达变化及桃红四物液预处理后对其表达的影响,进一步从分子水平探讨导致LI-RI的病理机制及桃红四物液对LI-RI的治疗作用。方法:78只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(M-IR组)、桃红四物液组(T-IR组)以及磷脂酶C阻断剂组(P-IR组)等四组,其中正常组大鼠不造成缺血处理,其余M-IR组、T-IR组及P-IR组在造模成功后按恢复灌注后0h、2h、4h、8h等时间点分组。取材后采用HE染色、荧光定量PCR检测等分子生物学技术观察大鼠腓肠肌形态变化及检测腓肠肌组织中Wnt-5a、PKC的表达变化,并对检测所得数据进行统计学处理。结果:除正常组外,M-IR组、T-IR组及P-IR组大鼠HE染色结果显示均出现腓肠肌纤维不同程度增粗、水肿,纤维间间隙较正常明显增宽并结构紊乱,同时伴有不同程度炎性渗出及细胞凋亡。与正常组相比较,M-IR组、T-IR组及P-IR组大鼠腓肠肌组织中Wnt-5a、PKC的mRNA表达均不同程度升高,组间对比差异有统计学意义(P0.05),且T-IR组及P-IR组中Wnt-5a、PKCmRNA的相对表达量在恢复灌注后相同时间点较M-IR组均降低(P0.05)。结论:1.肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌组织中Wnt-5a、PKC的表达均不同程度升高,骨骼肌损伤严重,表明LI-RI大鼠骨骼肌组织损伤可能与Wnt-5a、PKC的高表达密切相关。2.桃红四物液能够降低LI-RI大鼠骨骼肌组织中Wnt-5a、PKC的高表达,从而减轻LI-RI程度,对骨骼肌具有一定的保护作用。
【图文】：

用具,橡皮圈,大鼠,造模方法

2.2 造模方法实验前所有大鼠均置于室温环境下饲养 1 周。正常对照组大鼠不阻断血流，其余 72 只作为实验组动物参照张连元[16]《生理科学试验教材》中的造模方法，根据本课题组前期实验发表论文[17]中的造模步骤。利用 50ml 注射器及直径为0.8cm 和 1.0cm 大小的橡皮圈各一个自制成模具（图 1a），前期研究证实橡皮圈所产生的压力足以造成骨骼肌缺血。将橡皮圈套在实验大鼠右后肢大腿根部复制LI-RI，事先剪去大腿根部毛发及造模后橡皮圈处系扎尼龙扎带防止滑脱。当大鼠右下肢掌趾皮肤颜色变得苍白淤紫、皮温发凉即为右下肢血流成功阻断，表示造模成功（图 1d）；缺血阻断血流时间为 4 小时，注意造模时实验动物保温，避免低温等对缺血肢体造成影响及造成大鼠死亡；同时注意避免大鼠咬断橡皮筋导致造模失败。到时间后切断橡皮圈恢复血流灌注，大鼠右后肢掌趾恢复红润温暖即为血流复灌成功标志。

形态图,骨骼肌,再灌注,腓肠肌

第二部分结果与分析1、大鼠腓肠肌形态学观察除正常组大鼠外，其余组均以恢复灌注后 2 小时这一相同时间点观肠肌形态。正常组：腓肠肌颜色红润，肌肉纹理清晰，肌纤维分布均匀，肌肉模型组、桃红四物液组及 PLC 阻断剂组与正常组相比可见大鼠腓肠肌明度肿胀增粗，颜色明显苍白、伴有淤紫,尤以模型组大鼠明显，肌肉纹结构模糊，肌纤维增粗，肌肉弹性较正常明显减弱，同时伴有少量组织死表现。（见图 2 示）
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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