半枝莲对Ⅱ型糖尿病大鼠HPA轴—糖代谢的影响

发布时间：2020-05-19 23:56

【摘要】：T2DM的发生与HPA轴的功能失调有关,以糖脂代谢异常以及胰岛素抵抗为特征。目前治疗T2DM,多采用口服降糖药或注射INS以维持血糖水平,中药治疗也多集中于调节胰岛素抵抗,而忽略了神经内分泌在T2DM的发生、发展中的作用。因此,本实验以半枝莲为研究对象,以T2DM大鼠HPA轴为载体,采用COD-PAP法、GPO-PAP法、直接测定法、HE染色、PAS染色、醛复红染色法、免疫组化SABC法,检测半枝莲对T2DM大鼠HPA轴-糖代谢相关的激素、糖原、神经递质和组织结构的影响,阐明在半枝莲干预下,T2DM大鼠HPA轴的形态结构、功能变化与糖脂代谢之间的关联以及对T2DM的治疗效果。实验一T2DM模型的建立选用Wistar SPF级大鼠168只,4周龄,雄性,按体重无差异原则随机分为健康对照组(48只)和模型组(120只)。全部大鼠普通饲料适应性饲养1周后,模型组大鼠改为高糖高脂饲料,连续饲喂30d。第31d,禁食不禁水24h。第32d,全部大鼠称重,STZ造模:模型组按45mg/kg的体重,腹腔注射5‰STZ;健康对照组腹腔注射4.5ml/kg的柠檬酸盐缓冲液,30min内注射完毕。实验第34d、38d、45d、59d,观察大鼠的体重、饮水量;采血测定FBG变化,血清测定INS、CORT、TC、TG、HDL-C、LDL-C变化;HE染色观察下丘脑PVN与VMH、垂体、肾上腺、胰腺病理组织学变化;PAS染色观察下丘脑PVN与VMH、垂体、肾上腺内糖原数量变化;醛复红染色观察胰腺α细胞、β细胞、胶原纤维的变化;免疫组化SABC法观察5-HT、GABA在下丘脑PVN与VMH内的表达变化。实验结果如下:与健康对照组比较,模型组大鼠饮水量增高、体重下降;FBG增高,INS降低,血清CORT、TC、TG、LDL-C增高,血清HDL-C降低;下丘脑PVN和VMH内神经元数量减少,神经胶质细胞增多,腺垂体内嗜碱性细胞数量减少,肾上腺束状带细胞数量减少、坏死,胰腺α、β细胞数量减少、坏死,胶原纤维增多;T2DM大鼠的HPA轴相关组织内的糖原数量增多;5-HT和GABA在下丘脑PVN大细胞内的表达量升高,其在小细胞内的表达量降低;5-HT在下丘脑VMH-GE内的表达量降低,其在GI内升高;GABA在VMH-GE和GI内表达量均降低。实验二半枝莲对T2DM大鼠HPA轴-糖代谢相关指标的影响实验第38d,确定成模,全部实验动物分为5个组,依次为健康对照组,模型对照组,半枝莲低、中、高剂量组,每组24只大鼠。实验第39d,禁食不禁水24h,实验第40d,实验大鼠每天定时灌胃给药,半枝莲低、中、高剂量组按照1ml/100g的量分别灌服不同浓度(0.1g/ml、0.25g/ml、0.5g/ml)的提取液;健康对照组和模型对照组均灌服1ml/100g的生理盐水。整个治疗过程中,健康对照组饲喂基础饲料,其余各组饲喂高糖高脂饲料,实验期为30d。实验第44d、49d、59d、69d(半枝莲治疗第5d、10d、20d、30d),观察相关指标。实验结果如下:与模型对照组相比,半枝莲治疗组大鼠体重增高;FBG降低,血清CORT、TC、TG、LDL-C、INS降低,血清HDL-C升高;大鼠下丘脑PVN和VMH内的神经元数量增多、神经胶质细胞减少,腺垂体内嗜碱性细胞数量增多,肾上腺束状带细胞增多,胰腺β细胞数量增多、胶原纤维减少;半枝莲治疗组大鼠下丘脑PVN,腺垂体,肾上腺束状带内糖原数量减少,下丘脑VMH内糖原数量增多;半枝莲治疗第10d、20d和30d,5-HT在半枝莲低、高剂量组大鼠下丘脑PVN的表达量相近于健康对照组。半枝莲治疗第5d、10d,5-HT在低剂量组大鼠VMH-GE和GI区域内表达量均相近健康对照组。半枝莲治疗第5d、10d,半枝莲低剂量组大鼠下丘脑PVN内GABA表达量相近于健康对照组。半枝莲治疗第5d、10d,半枝莲低、高剂量组VMH-GE区域内GABA表达量均相近健康对照组,中、高剂量组GI区域内GABA表达量均相近健康对照组。上述研究结果表明:HPA轴参与了T2DM的发生、发展过程;半枝莲对T2DM大鼠的糖脂代谢异常具有调节作用;半枝莲对T2DM病大鼠HPA轴的功能具有正向调节作用;半枝莲对T2DM大鼠的降糖作用及HPA轴的保护作用存在时间和剂量依赖性,即治疗前期(5d~10d)半枝莲低、中剂量组效果较好,治疗后期(20~30d),中、高剂量组对T2DM治疗效果较好。
【图文】：

病理组织学,结构变化,神经胶质细胞,小细胞

14同时间的大鼠下丘脑 PVN 的病理组织学结构变化（H.E 染色，bar=50μm）。a1、a2、a3、a4 分别为实验d、59d 的健康对照组，b1、b2、b3、b4 分别为实验第 34d、38d、45d、59d 的模型组，其中“1”代表小细胞、“3”代表神经胶质细胞。e pathological histological changes of PVN in rats hypothalamus at different time (HE staining, bar=50μm)nd a4 are healthy groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment. The b1, b2, b3, and b4 aon the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. "1" for large cells, "2" for small cellsls.

病理组织学,结构变化,神经元

16不同时间的大鼠下丘脑 VMH-GE 的病理组织学结构变化（H.E 染色，bar=50μm）。a1、a2、a3、a4 分别为d、38d、45d、59d 的健康对照组，b1、b2、b3、b4 分别为实验第 34d、38d、45d、59d 的模型组，“ ”代神经元。 The pathological histological changes of the hypothalamus VMH-GE in rats at different time (H.E staining, bar =51, a2, a3, and a4 are healthy groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. The bnd b4 are model groups on the 34th, 38th, 45th, and 59th days of the experiment, respectively. " "for inhinal cells.
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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