珍珠层粉的质量控制研究

发布时间：2020-05-20 11:52

【摘要】：目的:珍珠层粉为蚌科动物三角帆蚌Hyriopsis cumingi(Lea)或褶纹冠蚌Cristaria plicata(Leach)或珍珠贝科动物马氏珍珠贝Pteria martensii(Dunker)除去角质层和棱柱层的贝壳,经加工而成的干燥细粉。三角帆蚌和褶纹冠蚌生存在淡水中,统称为淡水珍珠层粉,而马氏珍珠贝生存在海水中,故称之为海水珍珠层粉。珍珠层粉具有平肝,潜阳,定惊安神,清热止血的功效,在临床上多用于治疗胃及十二指肠溃疡,神经衰弱,头眩,耳鸣,心悸,失眠,咽喉肿痛,癫狂,惊痫等症。查阅文献可知,珍珠层粉主要由蛋白质等有机成分以及碳酸钙,微量元素等无机成分组成,其中蛋白质水解之后可以得到17种氨基酸,每种成分都对珍珠层粉发挥药效起着重要作用。现阶段对珍珠层粉的研究多集中于珍珠层粉的制备方法研究、其作为一种天然生物材料在诱导成骨方面的应用、其作为复方中的一味药材在临床中的运用以及珍珠层粉和珍珠粉鉴别方法的研究等方面,对珍珠层粉的质量控制研究较少。目前,珍珠层粉并没有被载入《中华人民共和国药典》中,但是作为一种应用越来越广泛的中药材,为其建立一个全面、可靠的质量控制方法尤为重要。本课题拟从珍珠层粉中有机成分及无机成分研究的角度等建立珍珠层粉的质量控制方法,此方法的建立也为珍珠层粉质量标准的研究提供一定的参考依据。方法:(1)从有机成分研究的角度进行珍珠层粉的质量控制,包括建立珍珠层粉HPLC柱前衍生化法氨基酸指纹图谱,测定其氨基酸含量及采用凯式定氮法测定珍珠层粉中蛋白质的含量。(2)从无机成分研究的角度进行珍珠层粉的质量控制,包括建立珍珠层粉XRD指纹图谱,进行珍珠层粉红外光谱分析、热重分析、电子扫描显微镜观测,测定珍珠层粉中碳酸钙的含量,建立松龄血脉康中珍珠层粉的评价方法等。(3)建立珍珠层粉的限量标准,包括农药残留限量标准及重金属限量标准,并测定珍珠层粉中微量元素的含量。(4)按照《中华人民共和国药典》(2015版,第四部)及《中国药典分析检测技术指南》(2017版)进行药材常规检查项的测定,如总灰分和酸不溶性灰分等。(5)利用小动物自主活动仪研究珍珠层粉对小鼠的镇静作用。(6)对地方药材标准中珍珠层粉项下欠缺的质量标准进行完善和补充。结果:(1)首次建立了珍珠层粉的HPLC氨基酸指纹图谱,得到了23个共有峰,并指认出其中15个共有峰,相似度评价,聚类分析和主成分分析所得结果保持高度一致,通过主成分排序坐标图推测:与淡水珍珠层粉相比,在海水珍珠层粉中天门冬氨酸、精氨酸、丙氨酸、胱氨酸和亮氨酸的含量较高,丝氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸的含量较低。珍珠层粉中氨基酸含量的测定结果证实了推测的正确性,并通过氨基酸指纹图谱的建立区分开了三角帆蚌和马氏珍珠贝两种不同基原的珍珠层粉。通过凯氏定氮法测定了珍珠层粉中蛋白质的含量,发现海水珍珠层粉中蛋白质的含量比淡水珍珠层粉中蛋白质的含量高。(2)首次建立了珍珠层粉的XRD指纹图谱,结合性状鉴别,相似度评价,聚类分析和主成分分析等多种分析方法,根据不同品质珍珠层粉拓扑异构的差别可以准确地鉴别珍珠层粉的质量差异。电子扫描显微镜可以观测到珍珠层粉的文石结构并估算出珍珠层粉中碳酸钙的含量。热重分析可以看出珍珠层粉随温度变化的轨迹,推算出珍珠层粉中有机质及碳酸钙的含量。使用傅立叶变换红外光谱可以观测到生物成因的高能文石区别于其他碳酸钙类药材的异常红外光谱特征,可区别珍珠层粉与其他文石类型药材。钙红指示剂滴定法测定了松龄血脉康中珍珠层粉的含量,可用于复方中珍珠层粉的质量控制。(3)运用ICP-MS法较为全面地测定了珍珠层粉中29种微量元素的含量,并首次建立了珍珠层粉的重金属限定标准。运用GC-MS和QuEChERS法未检测到珍珠层粉中存在农药残留。(4)按照《中华人民共和国药典》(2015版,四部)及《中国药典分析检测技术指南》(2017版)的规定测定了珍珠层粉中酸不溶性灰分的含量,结果表明所有批次珍珠层粉的酸不溶性灰分含量均在4%以下,符合规定。(5)运用小动物自主活动仪观测到珍珠层粉对小鼠具有明显的镇静的药理作用。(6)根据《福建省中药材标准》及《四川省中药材标准》珍珠层粉项下已有项目以及本研究实验结果作为补充项目,初步起草了珍珠层粉的质量标准草案。结论:本实验通过从珍珠层粉中有机成分、无机成分的研究,限量标准的建立,常规检查项的测定,药理作用的评价,质量标准草案的起草等多方面对珍珠层粉进行质量控制的研究,旨在为中药珍珠层粉的质量控制提供有效且全面的评价方法。
【图文】：

药材,色谱峰,氨基酸,正亮氨酸

逦珍珠层粉的质量控制研究逦逡逑中有一个峰为内标物正亮氨酸，所以一共得到２３个共有峰，与氨基酸混合标准品溶液逡逑进行对比，指认出１５个氨基酸，另外两个氨基酸，由于部分批次中的含量太低，未被逡逑“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”匹配为共有峰。逡逑

树状图,珍珠层粉,树状图,聚类分析

Ｓ１７邋（浙江诸暨阮市２０１７年），第四类为Ｓ５邋（广东澳珍药业１７０８０２批次），，Ｓ６逡逑（广东澳珍药业１７０８０３批次），Ｓ１２邋（浙江诸暨２０１８年），第五类为Ｓ２邋（浙江诸暨江逡逑薄２０１７年），Ｓ４邋（河南信阳罗山２０１８年），Ｓ１０邋（安徽黄山２０１８年），第六类为Ｓ７逡逑（广东湛江２０１７年）和Ｓ１３邋（广西北海）。逡逑聚类分析结果与相似度评价保持一致，根据聚类分析结果可知，第一类均为浙江诸逡逑暨三角帆蚌基原，为淡水珍珠层粉；第二类均为广东湛江所产马氏珍珠贝基原，为海水逡逑珍珠层粉；第三类有浙江和湖南两个地区三角帆蚌基原，为淡水珍珠层粉；第四类为浙逡逑江和广东两个地区三角帆蚌基原，为淡水珍珠层粉；第五类为浙江，河南，安徽三个地逡逑区三角帆蚌基原，为淡水珍珠层粉？，第六类为广东和广西两个地区马氏珍珠贝，为海水逡逑珍珠层粉，通过相似度评价可知，珍珠层粉所含氨基酸成分相似度较高，药材质量比较逡逑接近，但是通过聚类分析，可以明显地看出，不同产地的珍珠层粉氨基酸成分差异不大，逡逑但是不同基原（即三角帆蚌和马氏珍珠贝）的珍珠层粉氨基酸成分之间存在明显的差异。逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1

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