淫羊藿低糖苷组分的制备技术及工艺工程化研究

发布时间：2020-05-21 06:13

【摘要】：中药制备技术及其工艺工程化是中药生产向现代化大工业化迈进的重要一步,在中药组分制备技术工艺工程化的过程中,应结合现有生产技术和自动化先进生产设备,在GMP等要求的指导下进行工艺的合理调整和多层次、全过程、动态的质量控制,大幅度提高中药组分生产效率的同时确保其质量均一稳定,有利于提高未来组分中药制剂产品给药剂量的可控性、用药安全性和有效性。这样才能在当今医药市场上站稳脚跟,更好的推动中药国际化进程发展,提高中药在国际医药市场的认可度。淫羊藿为小檗科淫羊藿属多年生草本植物,本课题组围绕着它申请并开展了多项国家自然基金项目的研究工作,前期研究表明淫羊藿具有明确的抗骨质疏松作用,其发挥药效的主要活性成分为黄酮类化合物,多以黄酮糖苷的的形式存在于饮片中,随着携带糖基数目的增加,溶解性增加,但吸收性变差,低糖苷的吸收好于多糖苷的吸收,且起效物质为淫羊蕾低糖苷;而经过加热炮制和肠道菌代谢有助于淫羊蕾多糖苷黄酮向低糖苷黄酮转化,但并不能达到完全转化的程度。本文旨在建立从饮片总黄酮醇提取,到酶解提高淫羊藿总黄酮中低糖苷的含量,再到分离纯化富集获得纯度较高的淫羊藿低糖苷组分的整套制备技术,更好的实现其工艺工程化,主要研究内容分如下:1、基于前期提取工艺研究中选用过于单一成分指标或粗糙测定紫外吸收总黄酮的评价标准,进一步优选用淫羊藿饮片中含量相对较高的四个多糖苷成分朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷代表整体淫羊藿总黄酮、共同作为指标成分评价工艺的优劣,通过单因素实验初步筛选出淫羊蕾总黄酮醇提工艺条件的因素和水平:乙醇浓度(40%、50%、60%)、提取次数(1、2、3次)、乙醇体积(18、20、22倍)和提取时间(1.5、2.0、2.5 h);在此基础上通过正交试验进一步优化得到最佳提取工艺条件:淫羊藿饮片中加入20倍的50%乙醇、加热回流3次、每次2.0 h的;为追求经济利益最大化、人力物力最小化的目标,通过与实际生产情况相结合对最优工艺进行调整,确定最终淫羊藿总黄酮醇提工艺条件为:淫羊藿饮片中加入20倍的50%乙醇,加热回流2次,每次2.0 h。2、搭建了一套可以始终维持常温状态下进行大批量回收乙醇、浓缩提取液的装置:陶瓷膜+反渗透膜,陶瓷膜装置可对提取液完成进一步的过滤除杂,反渗透膜装置浓缩提取液的的同时获得的回收乙醇溶液,更接近于醇提工艺中的提取溶剂乙醇浓度,有利于直接二次使用;整套装置始终处于常温状态下工作,避免高温加热致使化学成分被破坏或易挥发等损失现象的发生;两个装置的中试规模技术较为成熟,未来放大规模投入于中药产业化生产中,具有较高的可行性、极高的应用前景和价值。3、进行了纤维素酶作用下淫羊藿多糖苷单体的转化规律研究,结果表明朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷在纤维素酶作用下只脱去C-7位的葡萄糖基完全转化为对应淫羊藿低糖苷箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ,进一步说明通过引入体外酶解工艺有助于淫羊藿总黄酮中多糖苷向低糖苷转化,从而提高淫羊藿低糖苷黄酮化合物的含量。然后引入体外酶解的工艺方法,借助纤维素酶对淫羊藿总黄酮进行脱糖酶解反应,并通过单因素实验优化得到最佳酶解工艺条件,纤维素酶(料液比20:0.40)在65℃条件下与淫羊藿总黄酮反应3 h,即可将其中多糖苷黄酮化合物全部转化为低糖苷黄酮化合物。4、在课题组前期简单粗糙的分离纯化技术基础上,进一步细化梯度洗脱环节,并对局部环节采取再循环纯化富集操作,旨在提高淫羊藿低糖苷组分纯度的同时减少分离纯化富集过程中的目标组分成分的损失量。建立了局部再循环纯化富集淫羊藿低糖昔组分工艺,依次采用水洗、40%、60%和80%乙醇进行梯度洗脱,收集60%洗脱部分进行再循环纯化富集,收集合并两次分离纯化的80%乙醇洗脱液,结晶获得淫羊藿低糖苷组分,纯度超过80%。并借助HPLC-ESI-QTOF-MS技术辨析出淫羊藿低糖苷组分中6个主要成分,名称、相对分子质量和化学式分别为宝藿苷Ⅱ(500、C26H280O10)、箭藿苷A(676、C33H40O15)、箭藿苷 B(646、C32H38O14)、鼠李糖基淫羊藿次苷 Ⅱ(660、C33H40O14)、Anhydroicaritin-3-O-rha-dideoxyfuranose(658、C33H38O14)和宝藿苷1(514、C27H30O10)。5、本文在淫羊藿低糖苷组分制备技术基础上继续进行了工艺工程化研究,规划了整套制备技术工艺流程图、详细环节步骤和强调质量控制要点,旨在清晰明了的展示整套制备工艺中需要的技术和要求,以此确保工艺工程化的规范性、系统性和合理性。
【图文】：

色谱图,淫羊藿总黄酮,指标成分,色谱图

２．１．２．１邋ＨＰＬＣ色谱条件逡逑色谱柱为邋ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８邋（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，５＾ｍ）；参照邋２０１５邋版药典规定［１］，流动相分别为乙腈和水，按照下表２．１所述进行梯度洗脱检测；波长为２７０为３０°Ｃ；流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ；进样量为ｌＯｐＬ。逡逑表２．１流动相梯度洗脱表逡逑Ｔａｂｌｅ邋２．１邋Ｍｏｂｉｌｅ邋ｐｈａｓｅ邋ｇｒａｄｉｅｎｔ邋ｅｌｕｔｉｏｎ邋ｔａｂｌｅ逡逑时间（分钟）邋乙腈（％）逦７Ｘ邋（％）逡逑０＾２９逦２５逦７５逡逑２９逦？３０逦２５－＞４１逦７５－＾５９逡逑３０逦？５５逦４１逦５９逡逑５５邋？６０逦２５逦７５逡逑６０邋？７０逦２５逦７５逡逑

淫羊藿总黄酮,提取率

图２．２乙醇浓度对淫羊藿总黄酮提取率的影响逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｅｔｌｉａｎｏｌ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｎ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ邋ｆｒｏｍ邋Ｈｅｒｂａ邋Ｅｐｉｍｅｄｉｉ逡逑如图２．２所示，５０％乙醇浓度的淫羊藿黄酮类化合物提取率（峰面积）最大，随着乙逡逑醇浓度的增大提取率越来越低，可能是因为乙醇浓度越大越容易提取出叶绿素、树脂等脂逡逑溶性的物质，很可能影响到黄酮类化合物的溶出，因而提取率越来越低；而４０％提取率低逡逑于５０％提取率，可能由于溶剂提取“相似相容原理”，５０％乙醇极性比４０％乙醇极性更接逡逑近于淫羊蕾黄酮类化合物极性，因而４０％提取率稍低。因此选择４０％、５０％、６０％为后续逡逑正交试验设计中乙醇浓度的考察水平。逡逑２．２．２．２提取次数逡逑称取１００邋ｇ干燥淫羊着饮片，置于５邋Ｌ圆底烧瓶中，加入２０倍体积的５０％乙醇，加热逡逑回流提取１？４次，每次１．０邋ｈ，滤过，所得提取液分别用对应提取溶剂定容至５０００邋ｍＬ容逡逑量瓶中，摇句，过０．４５邋—有机滤膜，弃去初滤液，，收集续滤液。按照“２．１．２．１”项下色逡逑谱条件测定样品中４种指标成分（朝藿定Ａ、朝蕾定Ｂ、朝藿定Ｃ和淫羊藿苷）
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283.6

【相似文献】