类叶牡丹有效部位干预胶原诱导型关节炎大鼠的代谢组学研究

发布时间：2020-05-21 06:50

【摘要】：类叶牡丹(Caulophyllum robustum Maxim,CRM)为小檗科(Berberidaceae)红毛七属植物的根及根茎,又称红毛七、葳严仙和搜山猫等,在民间具有悠久的历史。据《中药大词典》记录,其具有理气止痛和祛风活血的功效,民间用于治疗风湿性关节炎、扁桃体炎及跌打损伤等症,且疗效显著。本文以类叶牡丹有效部位(CRME)为研究对象,以胶原诱导性关节炎(CIA)为药效学模型,选用特征性药效指标进行研究,运用代谢组学研究方法考察了 CRME对CIA大鼠的尿液和血浆代谢谱的干预作用,基于内源性代谢物水平找到CRME治疗RA的潜在作用靶点和通路。1、类叶牡丹有效部位干预CIA模型小鼠的药效学研究本文采用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1小鼠建立CIA模型,分别以炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2的含量作为量化指标,小鼠体重变化、足爪肿胀度、关节炎评分、免疫脏器指数、关节组织病理学和免疫组化结果作为辅助衡量指标,对低、中、高三个剂量的CRME抗炎和免疫作用进行评价。发现3种不同剂量的CRME均能显著改善CIA小鼠的关节炎症状,且高剂量的CRME抗炎作用优于雷公藤多苷片和甲氨蝶呤阳性药。CRME还通过抑制炎性细胞因子而具有一定的免疫抑制作用。因此,高剂量的CRME的抗炎和免疫效果最好。2、类叶牡丹有效部位干预CIA模型大鼠的尿液代谢组学研究以尿液作为生物样本,采用UPLC-TOF-MS与主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)相结合的代谢组学方法研究CRME干预CIA的作用机制。共鉴定了 56个与CIA相关的潜在生物标志物,20条由CIA扰动的代谢通路。CRME干预后,16个差异代谢物发生了变化,包括水平上升的2-吲哚羧酸、对苯二酚、马尿酸和苯甲酸,水平下降的17β-雌二醇-3-葡萄糖醛酸苷、胆甾烷醇、三羟基胆甾烷、豆甾烷醇、酪氨酸、D-核糖、N1-甲基-4-吡啶酮-3-甲酰胺、吲哚酚、2,4-二氨基丁酸、单异丁基邻苯二甲酸、α-CEHC和7-羟基-3-氧代胆酸。这些生物标志物分别涉及色氨酸代谢、酪氨酸代谢、能量代谢、胆固醇代谢和维生素代谢。给药后这些生物标志物的变化说明CRME是通过调节氨基酸代谢、能量代谢和脂质代谢来发挥治疗作用。3、类叶牡丹有效部位干预CIA模型大鼠的血浆代谢组学研究以血浆作为生物样本,采用UPLC-TOF-MS与PCA和PLS-DA相结合的代谢组学方法研究CRME干预CIA的作用机制。共鉴定了 34个与CIA相关的潜在生物标志物,17条由CIA扰动的代谢通路。CRME干预后,13个差异代谢物发生了变化,包括水平上升的11b-羟基孕酮、磷脂酰乙醇胺(PE)、3,4-二氢呋喃酮、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE)、溶血卵磷脂(LysoPC)、四氢叶酸、磷脂酰肌醇(PI)、二十碳三烯酸和9-脱氧-亚甲基-前列腺素E2,水平下降的磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰丝氨酸(PS)。这些生物标志物分别涉及雌激素代谢、甘氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢,甘油磷脂代谢,花生四烯酸代谢和不饱和脂肪酸的生物合成途径。给药后这些生物标志物的变化说明CRME是通过调节氨基酸代谢和脂肪酸代谢来发挥治疗作用。综上所述,CRME对CIA模型小鼠具有抗炎和免疫抑制作用,代谢组学研究结果说明CRME是通过调节氨基酸代谢、维生素代谢、能量代谢和脂质代谢通路治疗RA,这些潜在靶点通路可以为CRME抗RA作用机制提供一个新的解释。
【图文】：

图２－１邋（Ａ）各组小鼠右后肢状态图；（Ｂ）关节炎指数评分；（Ｃ）右后肢足爪肿胀率逡逑变化；（Ｄ）ＣＩＡ小鼠体重的变化率；（Ｅ）脏器指数．逡逑注：（ａ）Ｎｏｒｍａｌ：空白组（ｂ）Ｖｅｈｉｃｌｅ：模型组（ｃ）ＭＴＸ：甲氦蝶呤组（ｄ）Ｔｒｉ：雷公藤多苷逡逑片组（ｅ）Ｌｇｒｏｕｐ：ＣＲＭＥ高剂量组．（Ｉ邋土邋ｓ，ｎ＝６）（与空白组相比？？邋＃Ｐ＜０．０１；与模型组逡逑相比：＊Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１；与邋ＭＴＸ邋相比：ＡＰ＜０．０５，ＡＡＰ＜０．０１邋ａｎｄ邋ＡＡＡＰ＜０．００１；逡逑与邋Ｔｒｉ邋相比：＊Ｐ＜０．０５，邋☆☆Ｐ＜０．０１邋ａｎｄ邋＊☆☆？＜０．００１）逡逑Ｆｉｇ．２－１邋（Ａ）Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｎ邋ＣＲＭＥ邋ｏｎ邋ｄｉｓｅａｓｅ邋ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｈｉｎｄ邋ｐａｗ邋ｓｗｅｌｌｉｎｇ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ逡逑ｗｉｔｈ邋ＣＩＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．（Ｂ）ａｒｔｈｒｉｔｉｃ邋ｉｎｄｅｘ，（Ｃ）ｓｗｅｌｌｉｎｇ邋ｄｅｇｒｅｅ，邋（Ｄ）邋ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ％逡逑ａｎｄ邋（Ｅ）邋ｖｉｓｃｅｒａｌ邋ｉｎｄｅｘ．（ａ）邋Ｎｏｒｍａｌ邋ｇｒｏｕｐ，邋（ｂ）邋ＣＩＡ＋ｖｅｈｉｃｌｅ，邋（ｃ）邋ＣＩＡ＋ＭＴＸ，邋（ｄ）逡逑ＣＩＡ＋Ｔｒｉ，邋ａｎｄ邋（ｅ）邋ＣＩＡ＋Ｈ邋ｇｒｏｕｐ邋（９９．４邋ｍｇ／ｋｇ）．逡逑２４逡逑

ＣＩＡ邋ｍｉｃｅ．（Ａ）ＴＮＦ－ａ；（Ｂ）ＩＬ－６；（Ｃ）ＩＬ－ｉｐ邋ａｎｄ邋（Ｄ）ＰＧＥ２．逡逑２．３．４各组小鼠免疫组化的检测结果逡逑如图２－４邋（Ａ）所示，，棕褐色或棕褐色颗粒是ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５蛋白阳性表达逡逑的部分。图２－４邋（Ｂ）显示，ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５蛋白在模型组中的阳性表达率高于逡逑各给药组（Ｐ＜0．0５）。此外，Ｈ组ＣＩＡ小鼠ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白的ＩＯＤ体积为逡逑１３２５．１８，低于阳性药物组（Ｔｒｉ：１７６５．４３，ＭＴＸ：１７５１．４２），差异有统计学意逡逑义（Ｐ＜０＿００１邋）。逡逑２６逡逑
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2673879