红景天中有效成分的分离纯化、鉴定及活性研究

发布时间：2020-05-21 07:38

【摘要】：红景天(Rhodiola rosea)为景天属多年生草本植物,种类繁多,主要分布在新疆,有着“高原人参”的称号,主要成分有皂苷、多糖,黄酮和维生素等。近年来药理研究发现红景天具有抗缺氧、抗疲劳、抗衰老、抗抑郁症和免疫调节等多种作用,作为保健药物与食品资源已得到认可。目前研究最多的是红景天的活性成分提取工艺和有效成分分离纯化,有关其它成分和药理研究甚少。本文以抗衰老活性为研究重点,利用HSF和HaCaT细胞紫外照射受损来建立细胞光老化衰老模型,从四种天然产物中筛选得到效果最佳的红景天,从红景天的化学成分、生物活性入手,对其有效成分进行分离纯化,重点研究抗衰老活性。远志、酸枣仁、山麦冬和红景天粉末分别用75%乙醇加热回流提取得到乙醇粗提物,再经过有机溶剂分级萃取得到四个极性部位萃取物(石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相)。建立HSF和HaCaT细胞UVB照射损伤模型,确定细胞照射能量。对4个品种进行皮肤细胞的抗光老化衰老实验筛选,得到效果最佳的为红景天,再针对红景天的乙醇粗提物和四个极性部位进行抗氧化、抗肿瘤、抗衰老实验。在抗氧化中,以Vc为阳性对照,采用DPPH、ABTS、FRAP三种体系检测样品的抗氧化性,结果显示红景天整体样品的抗氧化性都很强,乙酸乙酯相和正丁醇相尤为突出;抗肿瘤中,整体效果一般,低浓度时几乎无抗癌作用;抗衰老中,红景天乙酸乙酯相和正丁醇相的效果最明显。综合考虑研究结果,证实红景天经过分级萃取后,活性成分大都集中在乙酸乙酯相和正丁醇相中,因此后续重点研究乙酸乙酯相和正丁醇相。为全面研究红景天的有效成分,提取红景天四大类(皂苷、黄酮、多糖和挥发油),测定四大类的含量,分别为总皂苷含量56.82%,总黄酮含量44.14%,总多糖含量55.58%,挥发油提取率为0.12%。对四大类进行了抗氧化、抗肿瘤和抗衰老活性的研究,结果表明:抗氧化活性中,黄酮和皂苷的抗氧化性较好于多糖和挥发油;抗肿瘤活性中,四者的效果都不明显;在抗衰老活性中,皂苷的效果是最佳的,且好于阳性对照,多糖和挥发油效果一般。利用硅胶柱、ODS柱、凝胶柱等分离手段,对红景天的乙酸乙酯相和正丁醇相进行分离纯化,得到四个单体化合物,结合现代波谱方法(~1H-NMR和~(13)C-NMR)进行物质鉴定结构,分别为:山奈酚、熊果苷、红景天苷和红景天素。探讨了四个单体的抗氧化性、抗肿瘤活性和抗衰老活性,结果显示单体的抗氧化性都较强,其中山奈酚的效果好于阳性对照,熊果苷效果和阳性对照相当,顺序为山奈酚熊果苷红景天素红景天苷;抗肿瘤活性中,低浓度时单体的效果和红景天整体的效果一致,对癌细胞无杀害作用,高浓度时,红景天素表现出较强的抗肝癌和抗肺癌细胞能力,较强于红景天整体;在抗光老化衰老实验中,单体都表现出较强的光老化修复能力,其中山奈酚和熊果苷的能力好于阳性对照,红景天苷和红景天素的修复能力稍弱于阳性对照,整体的效果都很强,值得深入研究。最后以单体作用于受损伤的HSF细胞为研究对象,测量细胞上清液中的炎症细胞因子,进一步确定细胞光老化衰老的机制。结果显示:模型组和空白组相比,一定量的UVB照射确实会引起炎症细胞因子增多,模型组细胞上清液中IL-6和TNF-α的含量显著多于空白组;与模型组相比,药物组细胞上清液中的IL-6和TNF-α随着浓度的增大而逐渐减少,说明单体确实能减少炎症细胞因子IL-6和TNF-α的释放,这可能是单体起抗光老化衰老的作用的第一步。通过减少炎症细胞因子的释放量来阻碍其基因蛋白的表达而起到抗衰老作用.
【图文】：

分级萃取,天然产物,乙醇提取物,实验流程

A:远志；B：酸枣仁；C：山麦冬；D：红景天图 2-1 四种天然产物乙醇提取物有机溶剂分级萃取实验流程图A: Polygala tenuifolia; B: Semen Zizyphi Spinosae; C: Liriopemuscari Bailey; D: Rhodiola roseaFig. 2-1 The different organic solvent on ethanol extractive of four kinds of TCM.2.2 衰老细胞建模衰老模型是利用紫外照射进行，研究需要适宜的模型，对模型采用科学的干预方法成为影响衰老研究的重要因素[57]。角质细胞和纤维细胞是皮肤衰老中涉及的主要细胞，本实验采用 HSF 和 HaCaT 这两种细胞建立细胞体外衰老模型，以此来评价 4 种天然产物的抗衰老效果。C

醇提物,天然产物,极性,活力

第二章红景天的筛选及乙醇提取物和四个极性部位的制备和活性研究胞实验设 3 个组，分别为阳性对照组（上述确定能量照射），实验药物组 (确定能量照射，，加含不同浓度样品的培养液：25，50，100，200，400，800μg/mL)，空白照射组（上述确定能量照），每组设 3 个平行。利用 MTT 法检测样品对细胞的修复效果：样品修复效果 R (%) = 实验药物组 OD/空白对照组 OD×100%当 R ＞ 100%，说明药物对细胞损伤起到修复作用；当 R ＝ 100%，说明药物对细胞损伤没有作用；当 R ＜ 100%，说明药物对细胞起伤害作用。2.2.5 结果与讨论2.2.5.1 测定样品细胞毒性BA
【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284

【参考文献】