几种中药对肾小管上皮细胞损伤的保护作用研究

发布时间：2020-05-21 09:56

【摘要】：本研究通过建立外源物(链霉素、尿酸、H_2O_2)诱导的体外肾小管上皮细胞损伤模型,研究了黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒两种保肾中药制剂的含药血清及黄蜀葵花和肉苁蓉提取物对肾小管上皮细胞毒性的保护作用,并建立大鼠体内链霉素肾毒性损伤模型,研究了黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒对其损伤的保护作用,结合体外和体内实验结果,初步探讨了黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒及黄蜀葵花和肉苁蓉对肾小管上皮细胞损伤保护作用的可能机制,为相关保肾中药的临床应用和进一步开发利用奠定了一定的理论基础。第一部分建立了三种外源物诱导的体外原代肾小管上皮细胞损伤模型,以期进一步探讨黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒两种中药制剂对肾毒性损伤的保护作用机制。采用链霉素、尿酸、H_2O_2对原代肾小管上皮细胞进行诱导,以形态学改变、细胞增殖抑制率及细胞LDH释放量作为评价指标,判断三种外源物的肾毒性作用,并通过AO/EB荧光染色观察细胞凋亡情况。结果表明:链霉素、尿酸、H_2O_2均使细胞的形态发生明显改变,对细胞的增殖均有抑制作用,使细胞LDH释放量增高,并且三种作用结果均呈浓度依赖性。综上所述,链霉素、尿酸、H_2O_2均可诱导原代肾小管上皮细胞构建体外肾毒性细胞模型。第二部分研究了黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒含药血清对链霉素、尿酸、H_2O_2三种外源物致肾小管上皮细胞损伤的保护作用。研究结果表明,与模型组比较,黄葵胶囊及苁蓉益肾颗粒高、中剂量含药血清均能显著减轻链霉素对细胞增殖的抑制作用(P0.05),并显著降低链霉素作用后细胞LDH释放量(P0.05);黄葵胶囊高剂量及苁蓉益肾颗粒中剂量含药血清能够显著减轻尿酸对细胞增殖抑制作用(P0.05);黄葵胶囊高、中、低剂量及苁蓉益肾颗粒高、中剂量含药血清能够显著降低尿酸作用后细胞LDH释放量(P0.05);黄葵胶囊高、中、低剂量及苁蓉益肾颗粒高、中剂量含药血清能够显著减轻H_2O_2对细胞增殖抑制作用(P0.05);苁蓉益肾颗粒中剂量含药血清能够显著降低H_2O_2作用后细胞LDH释放量(P0.05)。第三部分研究了黄葵胶囊主药黄蜀葵花和苁蓉益肾颗粒主药肉苁蓉水煎物和醇提物的高、中、低剂量(200mg/L、20mg/L、2mg/L)对三种外源物致兔肾小管上皮细胞损伤的保护作用。研究结果表明,与模型组相比,黄蜀葵花醇提物和水煎物的中、低浓度,肉苁蓉醇提物和水煎物的高、中浓度能够显著减轻链霉素对细胞增殖抑制作用(P0.05);黄蜀葵花、肉苁蓉的醇提物和水煎物均能够显著降低链霉素作用后细胞LDH释放量(P0.05);黄蜀葵花醇提物的高、中浓度,水煎物的高、中、低浓度及肉苁蓉的醇提物和水煎物能够显著减轻尿酸对细胞增殖抑制作用(P0.05);黄蜀葵花醇提物的中、低浓度,水煎物的高、中、低浓度及肉苁蓉的醇提物和水煎物能够显著降低尿酸作用后细胞LDH释放量(P0.05);黄蜀葵花醇提物的高、低浓度,水煎物的高、中浓度,肉苁蓉醇提物和水煎物的高浓度能够显著减轻H_2O_2对细胞增殖抑制作用(P0.05);黄蜀葵花醇提物的高浓度,水煎物的中、低浓度,肉苁蓉醇提物和水煎物能够显著降低H_2O_2作用后细胞LDH释放量(P0.05)。第四部分研究了黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒对链霉素致大鼠肾毒性损伤的保护作用。通过比较观察正常组、模型组和药物干预组的大鼠一般情况、测定血生化指标、尿生化指标、肾皮质氧化应激指标以及肾组织病理切片HE染色。结果表明:模型组与正常组相比,体重显著小于正常组,脏体比显著大于正常组(P0.05);肾皮质匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均小于正常组(P0.05);药物干预组与模型组相比,脏体比均小于模型组(P0.05);黄葵胶囊各剂量组血肌酐(SCr)值、血清尿素氮(BUN)值显著小于模型组(P0.05),苁蓉益肾颗粒各剂量组血清尿素氮(BUN)值、尿酸(UA)值显著小于模型组(P0.05);黄葵胶囊高剂量组、苁蓉益肾颗粒高剂量组的SOD活性和GSH-Px活性显著大于模型组(P0.05);病理切片染色结果显示,与正常组相比,模型组肾小管细胞间隙不清晰和肾小球周围纤维组织轻度增厚,药物干预组无明显差异。综上所述,两种保肾制剂可以在体内与链霉素肾毒性形成拮抗作用,并能降低尿酸水平,增强肾组织抗氧化能力。综上所述,黄葵胶囊及黄蜀葵花、苁蓉益肾颗粒及肉苁蓉对链霉素、尿酸和H_2O_2三种外源物诱导的体外肾小管上皮细胞损伤都具有不同程度的保护作用。黄葵胶囊和苁蓉益肾颗粒对链霉素致大鼠体内肾毒性损伤具有保护作用,并能降低尿酸水平,增强肾组织抗氧化能力,初步推测作用机制可能与拮抗链霉素及其引起的高尿酸和氧化应激所致的肾小管上皮细胞损伤有关。
【图文】：

2.3.1 链霉素诱导结果2.3.1.1 细胞形态的改变不同浓度的链霉素作用 RTECs 24h 后，显微镜下观察 RTECs 细胞形态，如图 2-1，部分细胞变长，固缩聚集，细胞光泽度减小，，体积缩小。随着链霉素浓度的增加，形态改变的细胞数量逐渐增多，贴壁细胞数量逐渐减少，呈浓度依赖性。空白组 0.5mmol/L 1mmol/L

显微镜下观察 RTECs 细胞形态，如图2-2，部分细胞变长，固缩聚集，细胞光泽度减小。随着尿酸浓度的增加，形态改变的细胞数量逐渐增多，聚集程度越严重，细胞数量逐渐减少，呈浓度依赖性。
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2674098