钩吻素子抗大鼠糖尿病性周围神经病变的作用

发布时间：2020-05-21 14:46

【摘要】：目的:在链脲佐菌素(streptozocin,STZ)致糖尿病性周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠模型上,从缓解动物痛敏尤其改善周围神经的传导功能、形态病变和神经生化指标、细胞凋亡等方面,较为全面评价钩吻素子对DPN的治疗作用,为其开发应用提供科学依据和理论基础。方法:(1)在STZ致DPN大鼠模型上,把SD大鼠随机分为对照组、模型组以及模型鼠钩吻素子(koumine)1.4 mg/kg、0.28 mg/kg处理组。自建模第35天开始灌胃给予相应药物,每天1次,连续9天,给药前及给药的第3、5、7天给药后60 min测定大鼠机械痛阈,行为学的方法观察KM对DPN大鼠机械痛阈的影响。(2)在上述造模前、给药前和最后一次给药后60 min进行坐骨神经传导速度的测定,神经电生理的方法观察KM对DPN大鼠神经传导速度的影响。(3)在上述神经传导速度测定后,取大鼠坐骨神经,用甲苯胺蓝染色法和透射电镜法在光镜和电镜下观察KM对DPN大鼠坐骨神经形态结构的影响。(4)在上述神经传导速度测定后,取大鼠坐骨神经,用免疫组织化学法观测KM对DPN大鼠坐骨神经中碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)和神经微丝蛋白(neurofilament protein,NFP)水平的影响。(5)在上述神经传导速度测定后,取坐骨神经,用TUNEL检测法观察钩吻素子对DPN大鼠坐骨神经细胞凋亡的影响。结果:(1)行为学结果显示,KM可显著提高DPN大鼠的机械痛阈。(2)神经电生理学结果表明,KM能提高DPN大鼠坐骨神经的运动神经传导速度。(3)甲苯胺蓝染色法结果显示,模型组大鼠坐骨神经有髓神经纤维整体稀疏松散,髓鞘厚薄不均、扭曲且髓鞘平均面积缩小,轴索内出现致密物质,且轴索面积缩小;与模型组相比,KM治疗组结构有所改善,尤其是髓鞘面积和轴索面积(P0.05)。电镜结果显示,模型组大鼠坐骨神经髓鞘呈节段性厚薄不均,扭曲,形成凸起,板层结构松解,且向内或向外膨出,伴有撕脱现象,轴索被挤压,轴索内部结构无明显病变;KM治疗组相对于模型组,髓鞘结构有所改善,部分髓鞘结构增厚,略有扭曲,板层结构小局灶性撕裂,轴索挤压程度也得到改善。(4)免疫组织化学法结果显示,KM可上调DPN大鼠坐骨神经内的MBP水平(P0.05),而对DPN大鼠坐骨神经内的NFP水平未有显著影响。(5)TUNEL检测法结果显示,KM可对抗DPN大鼠坐骨神经的细胞凋亡。结论:综上所述,钩吻素子对DPN大鼠具有显著的镇痛作用;可显著改善DPN大鼠坐骨神经的神经传导功能;显著改善DPN大鼠坐骨神经的病理变化;上调DPN大鼠坐骨神经碱性髓鞘蛋白的水平;对抗DPN大鼠坐骨神经的细胞凋亡。表明钩吻素子对DPN具有显著的治疗作用。
【图文】：

坐骨神经,固定液,戊二醛,剪刀

图 1 大鼠神经传导速度的测定Figure 1 Measure of motor nerve conduction velocity in rat2.5 甲苯胺蓝染色法参照史景泉等[16]的方法稍作修改，进行甲苯胺蓝染色。测定大鼠坐骨神经传导速度结束后，50 mg/kg 水合利醛腹腔注射麻醉大鼠，迅速用剪刀剖开股二头肌与半膜肌之间的皮肤，并沿两股之间进行钝性分离，让坐骨神经暴露，，并及时滴加固定液。用锋利的剪刀近端从坐骨神经切迹处剪断，远端从胫膝神经分叉处剪断，取 1cm 坐骨神经，迅速放入戊二醛中固定。实验步骤如下:1）前固定：将坐骨神经置于 3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1 M PBS (pH7.2)固定液中固定 2 h 以上（4 ℃）。

钩吻素子,体重,大鼠

图 2 钩吻素子对 STZ 致 DPN 大鼠血糖的影响Figure 2 Effects of koumine on blood glucose of STZ-induced DPN rats. Rats wereadministered i.p. STZ 70 mg/kg or vehicle. The day of STZ administration was regardedas day 0. Koumine (0.28 and 1.4 mg/kg) or vehicle was administered i.g. once per dayfor 9 consecutive days from post-administration day 34. Blood glucose was measuredbefore STZ administration (baseline), post-administration 72 h, post-administrationdays 34 and 43 (pre-drug and post-drug). Data indicate as mean ± S.E.M. (n=10-11 pergroup). ***P<0.001 versus control group, separate one-way ANOVA followed by LSDor Dunnett T3 test for each time point.1.2 钩吻素子对 STZ 致 DPN 大鼠体重的影响实验过程中，同时对大鼠的体重进行监测。在造模前，测定大鼠的基础体重值（181.00±0.36 g），在给药前（第 34 天）、给药后 3 天（第 37 天）、给药后 5 天（第39 天）、给药后 7 天（第 41 天）几个时间点对大鼠的体重进行监测。可见对照组
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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