肉灵芝提取物抗肿瘤活性研究

发布时间：2020-05-21 22:40

【摘要】：肉灵芝民间称为太岁,李时珍《本草纲目》记载有肉灵芝,并把它收入“菜”部“芝”类,可食用、入药,奉为“本经上品”,功效为“久食,轻身不老,延年神仙”。现代研究表明太岁是一种黏菌,是介于生物和真菌之间的一种原质体生物,既有原生物特点,也有真菌特点,是一种“特大型罕见粘菌复合体”。肉灵芝具有抗氧化、消炎、提高机体免疫力等多重药理作用,但其在抗肿瘤研究方面报道较少。本文以白山市林源春生物科技有限公司与本实验室合作人工培育的肉灵芝提取物为研究对象,分别测定了肉灵芝提取物中多糖、吡咯喹啉醌(PQQ)的含量;肉灵芝体外抗肿瘤活性研究中采用MTT法、Hocheset染色法、Annexin V-FITC/PI双荧光染色、PI单染流式细胞术检测肉灵芝提取物对HepG2细胞增殖、凋亡形态学、早期凋率、周期的影响;同时,通过肉灵芝提取物对ICR荷瘤小鼠体重、皮下瘤重、免疫器官、巨噬细胞吞噬功能、T细胞和B细胞刺激指数、NK细胞活性、ICR小鼠脾脏免疫细胞亚群、血清IL-2、IgG、IgM的影响来探讨肉灵芝提取物体内抗肿瘤活性。对肉灵芝提取物成分分析结果表明,其中多糖含量为165.800±15.011 mg/g,PQQ含量为4.198±0.641 mg/g,与文献报道的野生肉灵芝的含量相当。体外细胞存活率实验结果表明肉灵芝提取物对HepG2和LO2细胞都有抑制作用,其中对HepG2细胞的抑制作用更强。对HepG2细胞经Hoechst染色结果说明肉灵芝提取物能够诱导细胞凋亡。Annexin V FITC/PI双荧光染色结果说明肉灵芝提取物可引起HepG2细胞早期凋亡。PI单染结果表明肉灵芝提取物诱导细胞凋亡引起DNA量减少;体内ICR小鼠荷瘤实验结果表明:肉灵芝提取物有减缓荷瘤鼠体重下降的趋势,可明显抑制荷瘤鼠肿瘤的生长,有明显保护胸腺的作用,有改善巨噬细胞吞噬的趋势,可显著提高T细胞刺激指数、NK细胞活性、CD3+T淋巴细胞亚群百分比、IL-2的含量,因此肉灵芝提取物对荷瘤鼠机体免疫力具有明显的增强作用。上述实验结果为人工培育肉灵芝应用于抗肿瘤的药物研发提供了实验依据。
【图文】：

巨噬细胞

3.2 免疫细胞参与机体免疫应答和免疫反应的免疫细胞主要有淋巴细胞、单核/巨噬细然杀伤细胞等。其中淋巴细胞是机体免疫重要的效应细胞[39,40]。1）巨噬细胞巨噬细胞(Macrophages，m )主要通过胚胎或骨髓中的单核细胞分化而,42]。在机体免疫中具有吞噬等重要功能，是非特异性免疫系统中十分重要的细胞[43,44]。巨噬细胞在先天性免疫及获得性免疫系统中充当重要角色[45-48]

标准曲线,标准曲线,葡萄糖,多糖含量

（8）采用 200 目细胞筛网对细胞进行过滤，把各 EP 管中的细胞液转移到对应标记的流式管。（9）各加入 PI 染液 400 μL，于 4℃条件下避光染色 45 分钟。立即采用已经开启的流式细胞仪进行分析。2.2.8 结果统计与分析本研究结果重复三次以上，实验数据采用 Excel 结合 GraphPad 5 进行统计分析，，以 GraphPad 5 分析差异（*代表显著性差异即 P<0.05，**代表非常显著性差异即 P<0.01，***代表极显著性差异 P<0.001），平均值±标准差（Mean±SD）表示。2.3 实验结果与讨论2.3.1 苯酚-硫酸法测定肉灵芝提取物中多糖含量通过苯酚-硫酸法测定肉灵芝提取物中多糖含量，标准曲线如图 2.1 所示。待测样品的多糖含量如表 2-5 所示。
【学位授予单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】