石韦的HPLC指纹图谱研究与灰色关联度分析

发布时间：2020-05-22 12:00

【摘要】：目的:建立不同产地和品种石韦的HPLC指纹图谱,通过相似度分析、聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和一测多评分析(QAMS)对石韦的质量进行鉴定、分类和评价。此外,初步探索有柄石韦最佳提取方法抗泌尿结石活性成分与其化学指纹图谱的关联性,为中药的质量控制和药效评价提供科学依据。方法与结果:本学位论文首先利用HPLC色谱分析技术,建立42批不同产地和品种石韦样品的特征指纹图谱,得到20个共有指纹图谱特征峰;采用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A”和SPSS 19.0统计分析软件分别进行模式识别分析(相似度分析、HCA、PCA);此外,通过绿原酸(chlorogenic acid)对芒果苷(mangiferin)、芦丁(rutin)、山萘酚(kaempferol)的相对校正因子(RCFs)进行QAMS,并利用外标法(ESM)验证QAMS应用于石韦质量评价的可行性。其结果表明,HPLC指纹图谱结合相似度分析、HCA、PCA和QAMS可为石韦药材的真伪鉴别和质量控制提供科学的质量评价标准。此外,QAMS通过与ESM比较,确定了其对石韦质量评价的可行性。本学位论文还利用1%乙二醇自来水饮水和2%氯化铵灌胃诱导大鼠泌尿系草酸钙结石形成,通过EDTA络合滴定法和铬酸钾氧化甲基红催化光度法,测定大鼠尿液、血清和肾组织中钙(Ca2+)、镁(Mg2+)、草酸(Ox)的物质的量浓度,从而优化有柄石韦不同提取方法对大鼠泌尿系结石的影响,筛选出具有最佳疗效的提取方法。其结果表明,1%乙二醇和2%氯化铵可成功诱导大鼠泌尿系结石形成,并且有柄石韦水回流提取可有效降低钙的浓度,从而抑制结石形成,为石韦的进一步开发利用提供理论和实验依据。此外,在优化有柄石韦提取方法抗泌尿系结石的药效学基础上,建立10批不同产地有柄石韦水回流提取HPLC指纹图谱,得到74个特征峰的相对峰面积值,进一步通过各峰的相对峰面积值分别与大鼠尿液、血清、肾组织中钙、镁、草酸物质的量浓度建立灰色关联度(GRD)模型,通过关联系数,计算其关联度;并利用多元线性回归分析(OMLR)验证灰色关联度分析(GRA)在谱效关系中可行性,从而建立有柄石韦抗泌尿结石的谱效关系研究。其实验结果表明,通过GRA和OMLR,确定有柄石韦水回流提取物中的某一成分(43号峰)具有较高的抗泌尿系结石活性。结论:HPLC指纹图谱结合相似度分析、HCA、PCA和QAMS为石韦药材的鉴定、分类和质量评价提供了科学依据。此外,石韦的抗泌尿系结石活性与HPLC指纹图谱的结合,为“谱效学”关系研究提供了有广阔的应用前景。
【图文】：

HPLC指纹图谱,石韦,HPLC指纹图谱,溶剂

用 0.45 μm的滤膜过滤，即得样品溶液，分别精密吸取 20 μL 注入高效液相色谱仪检测，如图2-1。图 2-1 不同提取溶剂石韦的 HPLC 指纹图谱Fig. 2-1 The different P. lingua solvents of HPLC fingerprint.

HPLC指纹图谱,石韦,HPLC指纹图谱,超声提取

结果表明 70%乙醇超声提取时指纹图谱的相对峰面积较大，分离度较好，故选用 70乙醇超声提取石韦样品。2.3.1.2 提取时间的选择分别精密精密称取同一批次（C1）药材粉末 1.0 g，置磨口锥形瓶中，，加入 7乙醇 25 mL，称重，分别超声 1 h、1.5 h、2 h，冷却至室温后，过滤得提取液，在空干燥器中（70 °C，12 h）干燥至干膏，并用 50%甲醇稀释至 0.10 g mL-1，用 0.45 μ的滤膜过滤，即得样品溶液，分别进样检测，见图 2-2。
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1;O657.72

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