金佛山雪胆化学成分及抗肿瘤活性研究

发布时间：2020-05-23 23:34

【摘要】：金佛山雪胆(Hemsleya pengxianensis var.jinfushanensis)为葫芦科(Cucurbitaceae)雪胆属(Hemsleya)植物,主要分布于云南、四川、贵州、重庆等地区,富含葫芦烷型四环三萜类、木脂素类、有机酸类等成分。现代药理学研究表明,金佛山雪胆具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗HIV、保肝、治疗胃溃疡等活性。本课题在前期的研究基础上对金佛山雪胆进行系统深入的研究。目的:研究金佛山雪胆的化学成分,并对分离得到的单体化合物进行细胞毒活性筛选;研究细胞毒活性好的单体化合物的抗肿瘤活性及作用机制,为开发新的抗肿瘤药物提供理论依据。方法:采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、HPLC制备柱色谱、重结晶等方法,对金佛山雪胆乙酸乙酯部位的化学成分进行研究,根据单体化合物的IR、MS、NMR等波谱数据分析鉴定化合物结构;建立S180荷瘤小鼠模型,分组给药后取肿瘤组织,计算抑瘤率,评价雪胆乙酸乙酯部位的抑瘤作用;应用MTT法筛选所分离化合物对HT29细胞的细胞毒活性;采用PI染色法及Annexin V-FITC/PI双染法检测16,25-二乙酰基-葫芦素F和雪胆甲素对细胞周期及凋亡的影响;应用微丝、微管蛋白免疫荧光及Hoechst33342染色法观察16,25-二乙酰基-葫芦素F和雪胆甲素对细胞骨架的影响。结果:从金佛山雪胆乙酸乙酯部位中共分离鉴定了30个化合物,分别为:hemslepenside J(1)、hemslepenside K(2)、hemslepenside L(3)、hemslepenside M(4)、hemslepenside N(5)、hemslepenside O(6)、hemslepenside P(7)、hemslepenside Q(8)、hemslepenside R(9)、hemslepenside S(10)、scandenoside R8(11)、3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,27-dihydroxycucurbita-5,24(Z)-diene-11-one-27-O-β-D-glucopyr anoside(12)、短柄雪胆苷A(13)、3β,11,26-trihydroxycucurbita-5,24(E)-diene-26-O-β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(14)、carnosifloside I(15)、hemslepenside I(16)、jinfushanoside C(17)、jinfushanoside D(18)、hemslepenside G(19)、hemslepenside H(20)、scandenoside R3(21)、scandenoside R4(22)、jinfushanoside J(23)、carnosiflosideⅤ(24)、carnosiflosideⅢ(25)、scandenoside R6(26)、jinfushanoside K(27)、雪胆双糖(28)、16,25-二乙酰基-葫芦素F(29)、雪胆甲素(30)。金佛山雪胆乙酸乙酯部位高中低三个剂量对肿瘤生长的抑制率分别为47.83%、37.27%、30.43%。对30个化合物进行细胞毒活性筛选,结果表明化合物29和30的细胞毒活性强;细胞周期实验结果显示,与阴性对照组比较,化合物29和30均能显著诱导结肠癌HT29细胞的细胞周期阻滞于G_2/M期(P0.05),呈剂量依赖性;细胞凋亡实验结果显示,与阴性对照组比较,化合物29和30均能显著引起HT29细胞的细胞凋亡及细胞坏死数量的增加(P0.05),呈剂量依赖性;免疫荧光染色实验结果显示,化合物29和30均能引起HT29细胞肌动蛋白的聚集,严重破坏微丝细胞骨架结构。结论:从金佛山雪胆乙酸乙酯部位共分离得到30个化合物,其中1~10为新化合物。金佛山雪胆乙酸乙酯部位能显著抑制S180荷瘤鼠的肿瘤生长。16,25-二乙酰基-葫芦素F和雪胆甲素对包括结肠癌HT29细胞在内的多种癌细胞具有较强的细胞毒活性,其作用机制与诱导肌动蛋白聚集,破坏细胞骨架,阻滞细胞周期及促进细胞凋亡有关。
【图文】：

四环三萜,苷元,葫芦,片段

药用历史久远，在民间草药著作及 1977 年版的《中华人民作为民间用药，以抗菌消炎、清热解毒等功效应用于方剂组肠炎、上呼吸道感染等病[2-4]。近几年，关于雪胆属植物的国章在李莹等[1]综述的基础上，补充了近 3 年关于该属化学成植物化学成分型四环三萜及其皂苷014 年底，已发现了 50 余种葫芦烷型四环三萜化合物[4-20]，，，结构差异集中于母核的 C-2、C-3、C-7、C-11 和 C-16，均可能发生变化。2015 年至今关于雪胆属化学成分的报道明置依然相对固定，现总结如下：其苷元及片段结构见图 1

金佛山雪胆化学成分及抗肿瘤活性研究

Hemsloside-Ma4和hemsloside-Ma5的结构
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.1;R285

【参考文献】