补肾舒脊颗粒通过BMP通路延缓强直性脊柱炎异位骨化的机制研究

发布时间：2020-05-24 05:34

【摘要】：目的以DBA/1雄性小鼠和人骨髓间充质干细胞为研究对象,通过观察小鼠双后足肿胀、组织形态学变化和细胞诱导膜内成骨现象,探讨补肾舒脊颗粒通过BMP通路延缓强直性脊柱炎异位骨化的机制。方法1.动物实验:选取体重25±5g,周龄12周的DBA/1雄性小鼠40只,随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组(洛索洛芬钠组)和模型组,每组8只。当小鼠周龄为14周时,分别给予小鼠相应药物,于小鼠周龄的第20、22、24周时观察其双后足肿胀程度,并进行统计肿胀评分。在小鼠周龄第24周时取双后足前部及足跟韧带附着点部位标本病理切片,HE染色光镜下观察组织病理学形态结构的变化。2.细胞实验:将人原代BMSCs细胞传代扩增至第4代,直接种于六孔板、T-25培养瓶中,随机分为中药高剂量、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组(洛索洛芬钠组)和空白组。然后使用间充质干细胞培养基将上述细胞培养至90%以上后,再改用诱导培养基及含药血清进行诱导培养,28天后提取细胞的RNA和蛋白,并检测目标因子的表达。结果1.动物实验:⑴小鼠足部肿胀程度比较:各组小鼠14周龄后,均逐渐出现脚趾发红、肿胀、脚趾强直和脚趾变形等表现。且随着小鼠周龄的增加,肿胀程度也逐渐增加。在小鼠第20周时,各组之间比较有统计学差异(P0.05),其中中药高剂量组比低剂量组、模型组肿胀程度轻(P0.05);中药中剂量组比模型组肿胀程度轻(P0.05)。在小鼠第22周时,各组之间比较有统计学差异(P0.05),中药高剂量组与中剂量组均比模型组肿胀程度轻(P0.05);在小鼠第24周时,各组之间比较有统计学差异(P0.05),其中中药高剂量组、中剂量组与西药组均比模型组肿胀程度轻(P0.05)。在中药中剂量小鼠中,其24周龄较20周龄时肿胀程度重(P0.05)。⑵小鼠双后足前部及足跟韧带附着点部位病理评分比较:与模型组比较,补肾舒脊颗粒各剂量组及西药组评分均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。2.细胞实验:⑴补肾舒脊颗粒对BMP-4因子的影响比较:与模型组比较,西药组mRNA水平增加(P0.05);高剂量组、中剂量组mRNA与蛋白表达水平降低,具有统计学意义(P0.05)。与西药组比较,中药中剂量组mRNA与蛋白表达水平降低,具有统计学意义(P0.05)。⑵补肾舒脊颗粒对Smad-4因子的影响比较:与模型组相比较,中药高剂量组、中剂量组以及低剂量组mRNA与蛋白表达水平降低,具有统计学意义(P0.05)。与西药组比较,中药高、中、低各剂量组mRNA与蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P0.05)。⑶补肾舒脊颗粒对Runx-2因子的影响的比较:补肾舒脊颗粒对Runx-2 mRNA影响的比较:与模型组比较,中药低剂量组和中药中剂量组mRNA与蛋白表达降低,具有统计学意义(P0.05)。与西药组比较,中药低、中、高剂量组mRNA与蛋白表达降低,具有统计学意义(P0.05)。实验结论1.补肾舒脊颗粒高剂量、中剂量和西药均能在不同程度上改善DBA/1小鼠双后足的肿胀程度,且高剂量能够延缓小鼠双后足的肿胀程度。而西药虽然也能够延缓小鼠双后足的肿胀程度,但起效时间较补肾舒脊颗粒慢。2.病理:补肾舒脊颗粒各剂量组与西药组均能在不同程度上改善DBA/1小鼠双后足组织形态学变化,但补肾舒脊颗粒与西药相比差异不明显。3.补肾舒脊颗粒各剂量组均能不同程度抑制BMP-4、Smad-4和Runx-2因子的表达,说明补肾舒脊颗粒可以通过BMP通路延缓强直性脊柱炎异位骨化。
【图文】：

图 1 各组细胞生长曲线3.2 细胞鉴定人骨髓间充质干细胞培养 4 天后，进行诱导分化，培养 28 天后，形成矿化节。经番红 O 染色，出现明显红染现象，说明细胞符合实验要求（图 2）。

细胞造模鉴定
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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1 何廷智;谢琦;;针刀治疗强直性脊柱炎临床疗效及安全性系统评估[J];亚太传统医药;2015年22期

2 李广东;;中医针灸治疗强直性脊柱炎临床研究[J];中国卫生标准管理;2015年14期

3 孔维萍;陶庆文;张英泽;杨舒;徐愿;朱笑夏;金s，

本文编号：2678531