杨桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮保护棕榈酸诱导MIN6细胞功能障碍的作用及机制研究

发布时间：2020-05-24 17:05

【摘要】：目的:探讨杨桃根中2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)抗棕榈酸(PA)诱导MIN6细胞功能障碍的作用,以及对TLR4/My D88/NF-κB信号通路的调控作用。方法:MIN6细胞分为6组:正常对照组(NC组)、模型组(PA组)、阳性药组(TAK-242组)、DMDD低、中、高剂量组(DMDDL、DMDDM、和DMDDH组)。1、DMDD对MIN6细胞胰岛素水平、炎症因子水平、凋亡的影响:(1)DMDD对MIN6细胞胰岛素水平的影响:采用CCK-8法检测细胞活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测细胞胰岛素水平。(2)DMDD对MIN6细胞炎症因子表达的影响:ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)含量水平;实时荧光定量PCR法检测IL-6、TNF-α、MCP-1 m RNA的表达;(3)DMDD对MIN6细胞凋亡的影响:Annexin-V-FITC/Pl凋亡试剂盒、Hoechst33342/PI荧光双染试剂盒检测细胞凋亡水平;透射电子显微镜观察细胞凋亡形态;实时荧光定量PCR法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2 m RNA的表达;western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达。2、DMDD对MIN6细胞TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响:实时荧光定量PCR法检测TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表达;western blot法检测TLR4、My D88、细胞核磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、细胞浆磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达。结果:1、DMDD对MIN6细胞胰岛素水平、炎症因子水平、凋亡的影响:(1)DMDD对MIN6细胞胰岛素水平的影响:与PA组相比,DMDDM组、DMDDH组、TAK-242组中分泌至细胞外的胰岛素含量、细胞内的胰岛素含量及细胞内外总胰岛素含量水平均升高,差异均具有统计学意义(p0.05或p0.01),且呈剂量依赖关系。(2)DMDD对MIN6细胞炎症因子表达的影响:与PA组相比,DMDDL组、DMDDM组、DMDDH组、TAK-242组中IL-6、TNF-α、MCP-1 m RNA和含量水平降低,差异均具有统计学意义(p0.05或p0.01或p0.001),且呈剂量依赖关系。(3)DMDD对MIN6细胞凋亡的影响:Annexin-V-FITC/Pl凋亡试剂盒、Hoechst33342/PI荧光双染试剂盒检测结果均表明,与PA组相比,DMDDL组、DMDDM组、DMDDH组、TAK-242组中MIN6细胞总凋亡率均降低,差异均具有统计学意义(p0.05或p0.01或p0.001),且呈剂量依赖关系。透射电子显微镜观察MIN6细胞凋亡形态结果表明,与PA组相比,DMDDL组、DMDDM组、DMDDH组、TAK-242组可以改善PA所致的MIN6细胞凋亡形态,且呈剂量依赖关系。实时荧光定量PCR和western blot结果表明,与PA组相比,DMDDM组、DMDDH组、TAK-242组Caspase-3、Bax m RNA水平均降低,Bcl-2 m RNA和蛋白水平均升高,Bcl-2/Bax升高,差异均具有统计学意义(p0.05或p0.01或p0.001),且呈剂量依赖关系。与PA组相比,DMDDH组、TAK-242组Caspase-3、Bax蛋白水平均降低,差异均具有统计学意义(p0.05或p0.01),且呈剂量依赖关系。2、DMDD对MIN6细胞TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响:与PA组相比,LPS+PA组中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和细胞核p-NF-κB p65蛋白、细胞浆p-IκBα蛋白水平均上调,DMDDH+PA组、TAK-242+PA组中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和细胞核p-NF-κB p65蛋白、细胞浆p-IκBα蛋白水平均下调,差异均具有统计学意义(p0.05)。与LPS+PA组相比,LPS+DMDDH+PA组中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和细胞核p-NF-κB p65蛋白、细胞浆p-IκBα蛋白水平均下调,差异均具有统计学意义(p0.05)。与TAK-242+PA组相比,TAK-242+DMDDH+PA组中TLR4 m RNA和蛋白、My D88 m RNA和蛋白、NF-κB p65 m RNA和细胞核p-NF-κB p65蛋白、细胞浆p-IκBα蛋白水平均下调,差异均具有统计学意义(p0.05)。结论:杨桃根中DMDD可升高PA诱导的MIN6细胞胰岛素水平降低,可减轻PA诱导的MIN6细胞炎症反应,可减轻PA诱导的MIN6细胞凋亡。DMDD保护MIN6细胞抗PA诱导功能障碍的作用可能部分机制是通过下调TLR4/My D88/NF-κB信号通路来实现的。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】