肝引经药柴胡对大黄引药入肝作用影响的研究

发布时间：2020-05-26 00:07

【摘要】：目的:采用药动学与药效学相结合手段肝引经药对大黄引药入肝的作用研究,包括引经药柴胡与大黄配伍前后对大黄所含的蒽醌类成分在正常大鼠与α-萘异硫氰酸酯(ANIT)造成的黄疸型肝炎大鼠模型体内不同的分布情况及大黄与柴胡配伍后对大黄保肝作用的影响。方法:1.采用HPLC-UV法测定正常大鼠与模型大鼠体内大黄中大黄酸和芦荟大黄素的含量,包括大鼠血液及心、肝、脾、肺、肾五脏内的含量。色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相A相为甲醇,B相为0.1%磷酸水溶液,流速1 m L·min-1,梯度洗脱(0~10 min,75%~75%A;10~12 min,75%~80%A;12~28min,80%~80%A;28~29 min,80%~95%A;29~39min,95%~95%A);柱温为30℃;进样量均为10μL。考察各给药组在10 min、15 min、30 mim、45 mim、60 min、90 mim、120 min、3 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h的13个时间点大黄酸与芦荟大黄素在血液、心、肝、脾、肺和肾五脏内的含量,并通过SPSS17.0软件进行数据分析。2.采用生化指标及病理切片法考察大黄与柴胡配伍后对大黄保肝作用的影响。生化指标为谷丙转氨酶(ALT)、胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);病理切片主要考察对肝脏的影响,常规石蜡切片,HE染色。结果:1.建立了大黄酸、芦荟大黄素在正常大鼠与黄疸型肝炎大鼠血液与心肝脾肺肾五脏中的HPLC检测方法。在正常大鼠中,大黄酸与芦荟大黄素的线性相关系数介于0.9908~0.9989之间;大黄酸及芦荟大黄素的不同浓度的血液及心、肝、脾、肺、肾的样品日内精密度RSD介于4.15%~12.48%之间,日间精密度RSD位于4.54%~8.84%之间;大黄酸及芦荟大黄素在常温情况下,RSD介于4.35%~7.14%;大黄酸及芦荟大黄素在反复冻融情况下RSD介于5.05%~9.64%之间;大黄酸及芦荟大黄素在长期放置情况下RSD介于4.91%~9.60%之间;大黄酸及芦荟大黄素不同浓度的血液及心、肝、脾、肺、肾等样品相对回收率位于82.33%~100.72%之间;绝对回收率位于70.17%~83.28%之间,满足实验需要。在黄疸型肝炎大鼠体内,大黄酸及芦荟大黄素相关线性系数位于0.9906~0.9979之间;大黄酸及芦荟大黄素的不同浓度的血液及心、肝、脾、肺、肾的样品日内精密度RSD介于4.67%~8.83%之间,日间精密度RSD位于4.54%~8.84%之间;大黄酸及芦荟大黄素在常温情况下,RSD介于4.05%~8.68%;大黄酸及芦荟大黄素在反复冻融情况下RSD介于4.23%~8.09%之间;大黄酸及芦荟大黄素在长期放置情况下RSD介于4.12%~8.89%之间;大黄酸及芦荟大黄素不同浓度的血液及心、肝、脾、肺、肾等样品相对回收率位于86.14%~98.28%之间;绝对回收率位于70.22%~81.39%之间,满足实验需要。2.通过对正常大鼠与黄疸型肝炎大鼠在灌服大黄煎液与大黄柴胡煎液后在13个时间点在血液、心、肝、脾、肺和肾内大黄酸与芦荟大黄素的含量,对正常大鼠而言,配伍柴胡后可以改变大黄酸与芦荟大黄素的达峰时间,且能明显增加大黄酸和芦荟大黄素在肝脏内的分布。相比较大黄液,正常在使用大黄柴胡液后,血液中大黄酸的含量为原来的5.26倍,肝脏中大黄酸的含量为原来的3.31倍,其他脏器也有增加,但比较少,心脏中大黄酸的含量为原来的1.40倍,脾脏为1.36倍,肾脏为1.41倍,肺脏为1.17倍。从芦荟大黄素看,大黄柴胡液血液中含量为大黄液的9.64倍,肝脏中的含量为原来的4.12倍,肾中为1.77倍,而在心脏、脾和肺中含量较少,检测不到。但从结果仍可以看到正常大鼠在使用大黄柴胡液后可以显著增加肝脏内大黄酸与芦荟大黄素的含量。在黄疸型肝炎大鼠体内,在使用大黄柴胡液后,以大黄酸计,除肝脏与脾脏内成分增加,其余脏器内的含量均减少包括血液、心脏、肺脏和肾脏。肝脏内增加8.84%,脾内增加29.19%,肾脏中减少量较少,为19.97%,血液中降低56.70%,心脏中降低48.59%,肺内降低了38.27%。以芦荟大黄素计,血液中降低了62.46%,肾脏内降低了58.04%。肝脏中增加了8.82%。3.通过大黄、大黄柴胡、柴胡液对ANIT造成黄疸型肝炎大鼠的谷丙转氨酶(ALT)、胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量的检测以及与正常大鼠与该模型大鼠的比较,发现大黄对该模型确有良好的治疗作用;柴胡仅对该模型中肝细胞的保护有作用,影响指标ALT,但对该模型中SOD、MDA等氧化性指标及TBA、TBIL及AKP黄疸指标无作用;在将大黄柴胡合用后可以起到更好的治疗黄疸型肝炎大鼠的作用。结论:无论在正常大鼠体内还是黄疸型肝炎大鼠体内,在加入柴胡后,均可以显著增加大黄中大黄酸和芦荟大黄素在肝脏内分布,说明柴胡对大黄确有引药入肝的作用。从药效学实验看,在加入柴胡后,大黄对黄疸型肝炎的预防与治疗作用更加显著,对黄疸型肝炎的特征指标作用明显,且柴胡仅起到保护肝细胞的作用,对黄疸的特征指标无明显作用,表明治疗作用的加强可能与柴胡的引药入肝作用有关。实验结果从药效学的角度为柴胡的引药入肝作用提供了一种佐证,也为后续引经药的研究提供了一定的基础。
【图文】：

模型,柴胡,统计学意义,组数据

△表示与模型组相比 P＜0.05*表示与大黄组相比 P＜0.05**表示与大黄组相比 P＜0.01由表40可见，模型组的TBA、TBIL及AKP与正常组比较，三者数据均明显升高，将每组数据进行比较，有统计学意义（P＜0.05）；大黄组、大黄柴胡组的TBA、TBIL及AKP与模型组组比较，，数据均降低，且将每组数据进行比较有统计学意义（P＜0.05）；柴胡组TBA、TBIL及AKP与模型组比较，数据相差不多，每组数据比较，没有统计学意义（P＞0.05）；大黄组与大黄柴胡组在TBA、TBIL及AKP进行比较，大黄柴胡组更低一些，更靠近正常组，且每组数据比较有统计学意义（P＜0.05）。由表40可见，模型组ALT与正常组比较，数据升高，且两者比较有统计学意义（P＜0.05）；大黄组、大黄柴胡组与柴胡组ALT与模型组比较，均显著降低，数据比较有统计学意义（P＜0.05），大黄柴胡组与大黄组比较，数据降低更明显，两者比较，数据有统计学差异（P＜0.05）。3.5.2 对肝组织的形态的影响研究

柴胡,统计学意义,组数据

△表示与模型组相比 P＜0.05*表示与大黄组相比 P＜0.05**表示与大黄组相比 P＜0.01由表40可见，模型组的TBA、TBIL及AKP与正常组比较，三者数据均明显升高，将每组数据进行比较，有统计学意义（P＜0.05）；大黄组、大黄柴胡组的TBA、TBIL及AKP与模型组组比较，数据均降低，且将每组数据进行比较有统计学意义（P＜0.05）；柴胡组TBA、TBIL及AKP与模型组比较，数据相差不多，每组数据比较，没有统计学意义（P＞0.05）；大黄组与大黄柴胡组在TBA、TBIL及AKP进行比较，大黄柴胡组更低一些，更靠近正常组，且每组数据比较有统计学意义（P＜0.05）。由表40可见，模型组ALT与正常组比较，数据升高，且两者比较有统计学意义（P＜0.05）；大黄组、大黄柴胡组与柴胡组ALT与模型组比较，均显著降低，数据比较有统计学意义（P＜0.05），大黄柴胡组与大黄组比较，数据降低更明显，两者比较，数据有统计学差异（P＜0.05）。3.5.2 对肝组织的形态的影响研究
【学位授予单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】