姜黄素改善外源性一氧化氮所致小鼠胃排空障碍的ICC相关机制探究

发布时间：2020-05-26 09:01

【摘要】：目的利用一氧化氮(NO)前体—L-精氨酸制作小鼠胃排空障碍模型,预先给以姜黄素灌胃,观察姜黄素减轻小鼠胃排空障碍的作用是否与胃组织中启动慢波蠕动的卡介间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)相关信号通路有关。通过检测ICC特异性酪氨酸激酶受体(c-kit)及其特异性配体(Stem Cell Factor,SCF)、钙激活氯离子通道功能蛋白(Anoctamin-1,Ano1)以及ICC与平滑肌细胞间的缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的变化,研究姜黄素的作用机制。方法36只4周龄健康昆明种雄性小鼠,体质量22~25 g,适应性喂养一周后随机分为对照组、姜黄素组、L-精氨酸组和姜黄素+L-精氨酸组,每组9只。姜黄素组和姜黄素+L-精氨酸组给以0.2 ml姜黄素(200 mg/kg)混悬液灌胃,每天一次连续15天,其它组给以等量的溶媒溶液灌胃作为对照。从灌胃的第11天开始,L-精氨酸组、姜黄素+L-精氨酸组小鼠分别给以0.2 ml L-精氨酸(2 g/kg)混悬液灌胃,共5天。实验结束后,小鼠禁食24小时,可以自由饮水。测定胃排空率前每只小鼠灌胃0.8 ml阿拉伯胶混悬液一次,20分钟后进行脱臼处死小鼠。取部分胃组织提取总m RNA,运用实时荧光定量RT-PCR技术检测c-kit、SCF、Ano1以及Cx43的m RNA表达量;运用Western blot法检测c-kit、Ano1以及Cx43在蛋白水平的表达;运用免疫荧光法检测c-kit、Ano1以及Cx43免疫组化表达的变化。结果与对照组(56.67±9.18)相比,L-精氨酸组(32.83±11.20)胃排空率明显降低(P0.01);L-精氨酸组c-kit(0.62±0.22)、SCF(0.58±0.19)m RNA表达相对定量与对照组的c-kit(1.00±0.15)、SCF(1.00±0.18)m RNA表达相对定量比较明显减少(P0.01);Western blot检测的胃组织中c-kit蛋白量变化和上述m RNA表达量变化基本一致;胃组织冰冻切片的免疫荧光染色结果显示,c-kit的阳性表达主要位于胃壁的环形和纵行平滑肌之间,阳性表达的量和强度和上述Western blot检测的结果相似。L-精氨酸组小鼠Ano1 m RNA的表达(0.51±0.23)与对照组(1.00±0.11)相比明显降低(P0.01);Western blot检测的胃组织中Ano1蛋白量变化和上述m RNA表达量变化基本一致;胃组织冰冻切片的免疫荧光染色结果显示,Ano1的阳性表达主要位于胃壁的环形和纵行平滑肌之间,阳性表达的量和强度和上述Western blot检测的结果相似。L-精氨酸组小鼠Cx43 m RNA的表达(0.55±0.15)与对照组(1.00±0.13)相比也降低(P0.01);Western blot检测的胃组织Cx43蛋白变化和m RNA变化基本一致;免疫荧光染色结果显示,Cx43阳性表达广泛分布于平滑肌肌细胞周围,阳性染色比例无明显改变而平均染色强度变化和Western blot检测结果相似。而与L-精氨酸组相比,姜黄素+L-精氨酸组小鼠胃排空率明显提高(48.39±10.34)(P0.01);胃组织中c-kit(0.83±0.19)(P0.05)及其配体SCF(0.86±0.15)(P0.01)m RNA表达量均显著改善;Western blot检测c-kit蛋白表达量有所提高、免疫荧光阳性表达的量和强度也有所提高;姜黄素+L-精氨酸组小鼠Ano1 m RNA表达量显著改善(0.87±0.20)(P0.05);Western blot检测Ano1蛋白表达量有所提高、免疫荧光阳性表达的量和强度也有所提高;姜黄素+L-精氨酸组小鼠Cx43 m RNA表达量显著改善(0.81±0.20)(P0.05),Western blot检测Cx43蛋白表达量有所提高以及免疫荧光阳性染色比例无明显改变而平均染色强度略有提高。结论姜黄素能显著改善外源性一氧化氮引起的功能性胃排空障碍,其机制与改善胃组织中ICC相关的信号通路有关。姜黄素通过增加小鼠胃组织中c-kit/SCF、Ano1以及Cx43的表达,可能恢复ICC的慢波启动功能,改善与平滑肌细胞间的信息传递,从而改善外源性一氧化氮引起的胃肠功能障碍。
【图文】：

鼠一般状况和体重鼠在喂养过程无明显不良变化。摄食摄水正常，活动精神状态良，大小便正常。结果显示各组小鼠体重对比没有明显改变，体重统计学差异（P>0.05）（表 1、图 1）。表 1 各组小鼠体重变化的比较（x S，n=9）able 1 Comparison of body weight changes in each group（x S，n=9）分组 体重(g)对照组 33.6±2.0姜黄素组 32.8±2.1L-精氨酸组 32.0±1.9姜黄素+L-精氨酸组 32.5±1.8

到抑制；与 L-精氨酸组相比，姜黄素+L-精氨酸组的胃排空率有<0.01），，姜黄素对小鼠胃排空率有所改善（表 2、图 2）。表 2 姜黄素对 L-精氨酸所致的小鼠胃排空率的影响（x S，n=9）ffect of curcumin on gastric emptying rate in mice induced by L-arginine（x S分组 胃排空率(%)对照组 56.67±9.18姜黄素组 48.05±11.56L-精氨酸组 32.83±11.20##姜黄素+L-精氨酸组 48.39±10.34 照组相比，##P<0.01；与 L-精氨酸组相比， P<0.01
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2681597