红景天苷对应激性高糖H9c2心肌细胞的保护作用及机制研究

发布时间：2020-05-27 08:06

【摘要】：目的:利用高糖及H202建立应激高糖H9c2心肌细胞模型,探讨应激性高糖对H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激性高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法:将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组(C组):用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基培养24h;②高糖组(G组):用含33.3mmol/L葡萄糖的培养基培养24h;③H202组(H组):用含100 μ mol/1 H202的低糖培养基培养2h后,换成低糖培养基继续培养22h;④高糖+H202组(G+H组):用含100 μ mol/1 H202的高糖培养基培养2h后,换成高糖培养基继续培养22h;⑤红景天苷+高糖+H202组(S+G+H组):用含100 μ mol/lH202+0.4mg/ml红景天苷的高糖培养基培养2h后,换成含0.4mg/ml红景天苷的高糖培养基继续培养22h。CCK-8法测定细胞活力,确定H202的作用浓度以及红景天苷的最适实验浓度及作用时间。心肌细胞分组培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率、Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平、JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果:1.与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平明显升高(P0.01);OPA1蛋白表达水平明显降低(P0.01);线粒体膜电位下降(P0.05);细胞凋亡率升高(P0.05);与C组比较,H组及G+H组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平明显升高(P0.01);OPA1蛋白表达水平明显降低(P0.01);线粒体膜电位明显下降(P0.01);细胞凋亡率升高(P0.01)。2.与G+H组比较,S+G+H组Drp1蛋白表达水平明显降低(P0.01);OPA1蛋白表达水平明显升高(P0.01);线粒体膜电位升高(P0.01);细胞凋亡率降低(P0.01)。结论:1.应激性高糖通过抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,降低线粒体膜电位,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。2.红景天苷可抑制应激性高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡,以及升高线粒体膜电位水平有关,对应激性高糖心肌细胞具有一定的保护作用。
【图文】：

实验结果显示，０？４００ｕｍｏｌ／Ｌ邋Ｈ２０２作用于Ｈ９ｃ２细胞２ｈ后，细胞生存率随着Ｈ２0２浓逡逑度升高降低，每组与对照组相比，均有明显差异（Ｐ＜０．０１），处于ｌ00ｕｍｄ／Ｌ时，，细胞活逡逑力下降４９％左右，选用１００ｕｍｏｌ／Ｌ作为后续实验的浓度。（见图２－１、表２－１）逡逑逦表２－１不同浓度Ｈ２０２对Ｈ９ｃ２心肌细胞活力的影响逦逡逑Ｈ２０２邋浓度（ｔｉｍｏｌ／Ｌ）逦ｎ逦存活率逦逡逑０逦６逦１００％逡逑５０逦６逦８０．９６±２．１１％＊＊逡逑１００逦６逦４９．２２±１．４２％＊＊逡逑２００逦６逦３５．６７±０．５６％＊＊逡逑４００逦６逦３丨．０５±１．７５％＊＊逡逑注：与对照组组间比较，＊＊户＜０．０１逡逑一邋１５0ｉ逡逑２逡逑芒逡逑８逡逑＾邋ｌｏｏ－逡逑１５Ｊ邋＿邋．逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋５０逦１００逦２００逦４００逡逑Ｈ２０２浓度（ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑图２－１不同Ｈ２０２浓度对Ｈ９ｃ２心肌细胞活力的影响逡逑注：与对照组组间相比，＊＊户＜0．0１逡逑３．２红景天苷不同浓度及作用时间对Ｈ９ｃ２心肌细胞活力的影响逡逑实验结果显示，０、０．１、０．２、０．４、０．８浓度的红景天苷对高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑环境的心肌细胞作用２４ｈ，显示红景天苷在０．４ｍｇ／ｍｌ，心肌细胞活力最高，与其余各组相逡逑比，具有显著差异（Ｐ＜０．０１），选用此浓度作为最适合作用浓度；选用０．４ｍｇ／ｍｌ红景天苷逡逑对高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ，２ｈ）环境的Ｈ９ｃ２心肌细胞分别作用１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ，结果显逡逑示

ｒｍＭｍ逡逑０逦０．１逦０．２逦０．４逦０．８逡逑图２－２不同红景天苷浓度对应激高糖Ｈ９ｃ２心肌细胞活力的影响逡逑注：与其余各组组间相比，＊＊Ｐ＜０．０１逡逑0４１逡逑Ｌ．邋｛逡逑芒逦＊逡逑８邋３－逦丁逦－Ｉ－逡逑名逦ＳＳＳ５５５邋｜逦｜逡逑°０逦微微逡逑Ｉ２■~枺遅 逡逑＾逦＾逦■逡逑Ｓ逦一逡逑ｕ邋0逦ＲＳＳＳＳｇｇａｉ逡逑１２ｈ逦２４ｈ逦４８邋ｈ逡逑图２－３红景天苷（０．４ｍｇ／ｍｌ）作用不同时间对Ｈ９ｃ２心肌细胞活力的影响逡逑注：与１２ｈ组间相比，＊Ｐ＜０．０５逡逑３．３红景天苷对应激性高糖Ｈ９ｃ２心肌细胞凋亡的影响逡逑流式细胞仪分析各组心肌细胞凋亡结果显示：与对照组相比，高糖组心肌细胞凋亡率逡逑明显增加，差异具有统计学意义（尸＜０．０５）；与对照组相比，Ｈ２０２组、高糖＋Ｈ２０２组心肌逡逑细胞凋亡率明显增加，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；与高糖＋Ｈ２0２组相比，红景天苷＋逡逑高糖＋Ｈ２０２组心肌细胞凋亡率明显降低，差异具有统计学意义（户＜０．０１）（见表２－２
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2683226