岗田酸联合姜黄素对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡机制的研究

发布时间：2020-05-27 10:38

【摘要】：研究背景近年来,由于肺癌死亡率的逐渐升高,预计我国将于2025年成为肺癌大国。因此肺癌预防和治疗刻不容缓!虽然治疗肺癌的方法有很多,但现在大多数患者仍需接受传统的治疗手段:化疗。但化疗的副作用大,疗效不断下降,临床化疗效果越来越不尽如人意,故亟需寻找新药物以增强肺癌化疗效果,降低化疗副作用。岗田酸是一类细胞渗透性聚醚类复合物,蛋白磷酸酶PP1、PP2A的抑制剂,低浓度下可诱导正常细胞癌变,极低浓度下可作为治疗癌症的药物,且在肺癌方面的治疗鲜见报道。姜黄素被人们认为是第三代抗肿瘤药物,1996年经美国FDA批准用于肺癌、结肠癌等的治疗,其与岗田酸联合应用于肺癌的研究未见报道。本文以聚醚类物质岗田酸、二酮类化合物姜黄素为研究药物,探究这两种药物对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并解析岗田酸与姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制,为研发治疗肺癌的新药物提供理论依据。研究方法1.MTT比色法检测与分析岗田酸、姜黄素及其两者的联合对A549细胞增殖的影响;金正均公式分析两药的互作关系;台盼蓝拒染实验检测A549活细胞数量,进一步检测药物作用效果。2.Giemsa染色法、Hoechst33258染色法、倒置相差显微镜、扫描电镜及透射电镜观察药物对A549细胞形态学的影响。3.荧光分光光度计检测A549细胞内ROS含量、JC-1标记的线粒体的去极化;荧光倒置显微镜下观察Rhodamine123标记的线粒体膜电位变化;Western Blot和琼脂糖凝胶电泳法检测岗田酸、姜黄素作用下线粒体途径中的蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、A549细胞遗传物质DNA的响应。研究结果1.一定剂量范围内,岗田酸和姜黄素及其二者联合均可抑制A549细胞的增殖,表现出时间和剂量依赖性,且双药联合的抑制效果要好于单药的作用。金氏公式计算结果证实了两药联合作用于A549细胞具有相加或协同作用。2.药物处理48 h后,A549细胞形态变圆,体积缩小,细胞相互分离,胞内染色质凝集,空泡化严重,膜外围出现凋亡小体,部分细胞破碎解体,表现出细胞凋亡现象。与单药处理组相比,岗田酸与姜黄素联合处理组细胞凋亡现象更严重。3.20 ng/m L岗田酸、20μg/m L姜黄素、20 ng/m L岗田酸+20μg/m L姜黄素处理48 h后,A549细胞内ROS含量极显著性上升,线粒体去极化严重;Rhodamine123检测线粒体膜电位也发现A549细胞内膜电位的下降,说明岗田酸与姜黄素可能是通过ROS、线粒体参与的胞内信号通路引发A549细胞凋亡。Western Blot结果显示:胞内蛋白Bax、细胞色素C的表达明显增多,Bcl-2表达下调,说明药物作用下细胞发生凋亡,两药联合作用比单药作用强,岗田酸和姜黄素都由线粒体凋亡途径诱导其凋亡。琼脂糖凝胶电泳结果显示:DNA条带大小不一,出现梯状条带,说明药物作用下A549细胞发生凋亡,核内染色质降解。联合处理组DNA条带最长、最亮,说明药物联合作用下细胞凋亡的程度比单药作用更强。结论上述结果表明,岗田酸、姜黄素联合可抑制人肺腺癌A549细胞增值,通过线粒体凋亡途径诱导其凋亡。
【图文】：

第四,姜黄素,实验检测,时间依赖性

第四部分实验结果第四部分实验结果1 岗田酸、姜黄素及联合对 A549 细胞增殖的影响.1 MTT 实验检测岗田酸对 A549 细胞增殖抑制率如图 1 所示，浓度在 0-60 ng/ml 范围内，岗田酸对 A549 细胞的增殖抑制作用不断增72h 时，随着岗田酸剂量的不断加大，抑制率不断的升高，，且与 24、48h 时相比，抑最高，说明有岗田酸不仅有剂量依赖性也具有时间依赖性。

折线图,姜黄素,抑制率,酸浓度

图 2 姜黄素作用于 A549 细胞的抑制率Fig2. The effect of Curcumin onA549 cells multiplication within 72h.同一时间与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，同一浓度与 24h 处理组比较 P<0.05，P<0.01。.1.3 MTT 实验检测岗田酸联合姜黄素对 A549 细胞的增殖抑制率如图 3，4，5 所示，20 μg/mL 姜黄素与三个岗田酸浓度（20 ng/mL,40 ng/mL,60 ng/m2h 内联合孵育 A549 细胞发现，A549 细胞存活率要低于岗田酸处理组和姜黄素处理组向看抑制率不断升高，呈现时间依赖性。三张折线图对比发现，岗田酸浓度越高，抑也是随之升高的。
【学位授予单位】：曲阜师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】