【摘要】：目的:初步探讨益气养阴温阳利水法治疗慢性心力衰竭的作用机制。方法:模型建立方法:采用腹主动脉缩窄术(AAC)建立压力超负荷诱导的慢性心衰大鼠模型,假手术组予以相同的手术但并不进行腹主动脉缩窄。实验分组及给药情况:术后6周,将存活的造模的大鼠随机分成三组:模型组、芪苈组、益气养阴温阳利水中药组(简称中药组),每组10只;另以余下的10只假手术组大鼠作为正常对照。芪苈组每天予芪苈强心胶囊粉剂制成的混悬液以0.1g/100g剂量定时灌胃一次;中药组每天予自制水煎剂益气养阴温阳利水方以12.13g/kg的剂量定时灌胃一次;模型组与假手术组每天予生理盐水定时灌胃一次,4ml/次;药物干预疗程均为4周。呼吸频率的测定:在建模前从62只健康大鼠中随机抽取10只,于大鼠安静时(约上午8:00—10:00)测定呼吸频率,计算平均值;建模6周后在药物干预前及药物干预4周后计算每只大鼠呼吸频率并记录均值;比较不同时间点各组大鼠的呼吸频率变化。取材及标本检测:连续药物干预4周后,大鼠称重,记录体重(BW),以0.3ml/100g的剂量腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠,对全部大鼠进行彩色多普勒超声心动图检测以评估心脏结构及心功能变化。采用腹主动脉取血收集血液标本,ELISA检测血清中BNP、MMP-2、AngⅡ浓度。大鼠失血死亡后立即剪取心脏组织并分离左心室,用冰生理盐水冲洗干净并用滤纸吸干水分后分别称重,记录心脏质量(HM)、左心室质量(LVM),计算心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI),HMI=HM/BW,LVMI=LVM/BW。将剪碎的心室组织分成两部分,一部分置于4%多聚甲醛溶液中固定置于4℃冰箱中保存,以备做病理切片HE染色和Massion染色进行心肌细胞形态学检测和心肌纤维化观察及心肌胶原容积分数计算;另一部分放入-80℃冰箱中保存,以备Wstern Blot检测心肌TGF-β蛋白含量和rt-qPCR检测miR-21和SPRY2的mRNA表达水平。统计学方法:全部实验数据X~—±S表示,运用统计分析软件SPSS 23.0进行组间的单因素方差分析(one-way ANOVA),每两组间的多重比较采用LSD进行t检验,P0.05则认为差异有统计学意义。结果:AAC术后10周,接受AAC手术的大鼠一般情况较假手术组差,活动减弱,饮食、进水减少,毛色粗糙稀疏,呼吸频率加快,尤以模型组一般状态最差,中药组、芪苈组相较于模型组一般情况得到改善。大鼠心脏肥厚指标计算结果显示模型组大鼠HWI、LVWI显著高于假手术组(P0.01);超声心动图检测显示模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVESV、LVEDV、LVPWI、IVST、E/e’指标均明显高于假手术组(P0.05或P0.01);中药组、芪苈组这9个指标均高于假手术组、低于模型组(P0.05),中药组的HWI、LVWI较芪苈组降低(P0.01),中药组与芪苈组的LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LVPWT、IVST、E/e’之间差异无统计学意义(P0.05)。模型组LVEF较假手术组降低(P0.01),芪苈组、中药组LVEF与假手术组、模型组之间的差异均无统计学意义(P0.05),芪苈组、中药组、模型组、假手术组的LVEF均50%;四组的FS差异无统计学意义(P0.05)。病理切片HE染色观察到假手术组大鼠心肌细胞排列整齐、形态正常无增生肥大、间质无增生、无炎性细胞浸润,模型组大鼠呈现明显的心肌细胞排列紊乱、炎性细胞浸润,中药组、芪苈组心肌细胞排列尚规则,呈现轻微的细胞肥大和极少量间质增生、炎性细胞浸润,两组之间肉眼所见未见明显差异。Massion染色显示模型组较假手术组呈现明显的心肌纤维化,胶原容积分数增加(P0.01);中药组、芪苈组心肌纤维化程度较模型组明显改善,胶原容积分数降低(P0.01);中药组与模型组胶原容积分数差异无统计学意义(P0.05)。血清学检测显示模型组BNP、MMP-2、AngⅡ血清浓度明显高于假手术组(P0.05),中药组、芪苈组BNP、MMP-2、AngⅡ血清浓度高于假手术组(P0.05),较模型组则水平降低(P0.01)。Wstern blot检测提示TGF-β1蛋白表达量模型组、中药组、芪苈组均高于假手术组(P0.01),中药组、芪苈组较模型组水平降低(P0.05),中药组、芪苈组之间差异无统计学意义(P0.05)。Rt-qPCR检测显示模型组大鼠心肌miR-21表达较假手术组明显上升(P0.01),芪苈组、中药组miR-21水平较假手术组升高(P0.05),较模型组降低(P0.01);模型组、芪苈组、中药组SPRY2水平较假手术组均降低(P0.05),芪苈组、中药组较模型组SPRY2表达升高(P0.05);芪苈组与中药组miR-21、SPRY2的mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.慢性心衰大鼠心肌肥厚、心肌纤维化与血清BNP、MMP-2、AngⅡ升高、心肌组织TGF-β1蛋白表达增多、miR-21表达上调及SPRY2表达减少有关。2.益气养阴温阳利水方能降低慢性心衰大鼠心脏质量指数和左心室质量指数,减轻细胞肥大、心肌纤维化程度,抑制心室重构,改善心功能。3.益气养阴温阳利水方可通过降低慢性心衰大鼠血清AngⅡ、BNP、MMP-2水平及心肌组织TGF-β1的表达来逆转心室重构、改善心功能。4.益气养阴温阳利水方可抑制慢性心衰大鼠的心肌miR-21的水平,上调SPRY2的mRNA水平,从而抑制MAPK信号通路的激活和EMT的病理过程,阻止心肌纤维化保护心脏.
【图文】：
32图 1-6 超声心动图检测大鼠心功能彩色多谱勒超声心动图显示，与假手术组比较，模型肌均较肥厚，舒张末内径增大，以模型组最为明显，HMI体差异分别见表三和表四。
表 5 益气养阴温阳利水方对慢性心衰大鼠左室舒张功能的影响LVEDD（cm）LVESD（cm）LVEDV（ml）LVESV（ml）LVPWT（cm）IVST（cm）0.609±0.530**##▲▲0.350±0.510*#▲▲0.664±0.160*#▲▲0.096±0.023*#▲▲0.119±0.013**##▲▲0.1070.011**#0.778±0.842*#0.509±0.657**##1.224±0.255**#0.306±0.098*#0.230±0.48*##0.206±00.699±0.2230.420±0.4380.916±0.2080.204±0.0850.188±0.0170.1710.190.699±0.5400.413±0.4820.989±0.2200.217±0.0920.173±0.350.1680.04：与芪苈组比较*P＜0.05、** P＜0.01;与中药组比较# P＜0.05、## P＜0.01；与模型＜0.05、▲▲P＜0.01。：因心功能检测需要于大鼠处于安静状态，，个别大鼠因麻醉过浅未能准确检测心功能指纳，故每组大鼠样本量不尽相同。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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本文编号：
2683429
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