烟色烟管菌胞外多糖的纯化、性质及生物活性研究

发布时间：2020-05-27 15:48

【摘要】：烟色烟管菌(Bjerkandera fumosa)是担子菌门(Basidiomycota)的一种药用真菌,在民间具有广泛应用,但其活性组分及作用机制尚不清楚。本实验室前期对烟色烟管菌的液体发酵及菌丝体多糖的结构、理化性质及其免疫活性进行了系统研究,本论文在此基础上以葡萄糖为碳源发酵烟色烟管菌,对其胞外多糖进行制备、分离纯化、性质、结构和生物活性的相关研究。主要研究结果如下:(1)烟色烟管菌胞外多糖的制备及理化性质分析以葡萄糖液体发酵培养基培养烟色烟管菌,制备胞外多糖EPBF,得率为0.9g/L。理化性质分析结果表明,EPBF主要由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖以57.6:1.9:2.5:25.2:6.2:4.7:2.0的摩尔比组成,不含核酸和蛋白质;其平均分子量为3.5×10~5 Da;总糖、糖醛酸、多酚和灰分含量分别为63.57%、7.98%、0%和15.46%。(2)烟色烟管菌胞外多糖的分离纯化、结构及理化性质分析EPBF经DEAE-32纤维素阴离子层析和Sepharose G-75凝胶层析柱分离后,得到纯化组分EPBFG。通过HPGLC检测该组分为均一多糖,分子量为4.4×10~4Da。经测定其主要由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖以摩尔比为49.9:3.5:2.2:26.9:4.4:11.2组成;总糖和灰分含量分别为61.98%和6.34%。FT-IR和NMR分析结果显示EPBFG主要由α-Glc,α-Gal和α-Man构成,同时EPBFG不含有肽链或蛋白质,组分EPBFG的糖环形式为吡喃糖环,糖苷键构型为α型。(3)烟色烟管菌胞外多糖的生物活性研究测定了烟色烟管菌胞外多糖EPBF及其纯化组分EPBFG的抗氧化活性。结果显示在5 mg/mL条件下,两者的DPPH自由基清除活性分别为70.22%和83.89%,羟基自由基清除活性分别为70.99%和81.87%,亚铁离子螯合活性分别为78.29%和90.15%;12 mg/mL条件下,还原力分别为0.59和0.75。且抗氧化活性均以剂量依赖的方式增加,纯化组分EPBFG的抗氧化活性高于EPBF。同时检测了烟色烟管菌胞外多糖EPBF及其纯化组分EPBFG的体外抗肿瘤活性。研究显示EPBF及EPBFG对宫颈癌Hela细胞株的增殖有一定的抑制作用,并且对正常人体细胞H8细胞株没有毒害作用。相同浓度下纯化组分EPBFG的体外抗肿瘤活性高于EPBF。在2.5 mg/mL浓度下EPBFG对Hela细胞株抑制率达到48.44%。EPBFG在低浓度(≤1.5 mg/mL)时可以促进H8细胞株的增殖,浓度升高时抑制其增殖,但是抑制率均小于3%。利用流式细胞仪对多糖的抗肿瘤机理进行检测,推测EPBFG是通过抑制细胞周期的方式抑制Hela细胞株的增殖,从而发挥抗肿瘤作用。
【图文】：

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图 1-1 甲基化原理Fig.1-1 Methylation principle等人[55]研究的红树林植物后藤内生真菌（Aspergillus sp.）纯化结构，通过甲基化分析并结合核磁共振分析得出以下结论，ASS12)-α-Manp，支链为 β-Manp，β-Galf 构成的半乳甘露聚糖。高碘酸氧化法和 Smith 降解法酸氧化法和 Smith 降解法一般同时应用，Smith 降解方法是将通过的产物还原，再进行酸水解。因为糖基之间会在不同的位置进行氧化后会产生不同的氧化产物，最后通过水解产物来分析判断多糖等人[56]对碱提的杏鲍菇多糖纯化组分 PEAP-1 先进行高碘酸氧化EAP-1 分子主要存在的键型不被高碘酸氧化。再将氧化后的样品解，结合高碘酸氧化的结果，多糖 PEAP-1 中存在 1→3 和 1→6 连

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图 1-2 野生烟色烟管菌子实体Fig.1-2 The natual fruiting body from Bjerkandera fumosa色烟管菌多糖的研究色烟管菌是一种药用真菌多糖，在民间常用于治疗子宫癌，但是对于的研究近些年才陆续展开。烟色烟管菌的液体发酵培养多药用真菌多糖都来自于真菌的野生子实体，随着多糖的结构成分及、抗氧化活性、免疫活性等生物活性功能不断被研究发现，市场需求，，从而导致真菌野生子实体被过度的摘采，并且使其生存环境遭到严此恶性循环最终造成真菌资源大量减少、价格日趋昂贵、市场供不决目前面临的问题，液体发酵培养、人工培养等方法逐渐发展完善，
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284

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