艾纳香油对脂多糖介导巨噬细胞分泌炎性因子影响机制探讨

发布时间：2020-05-27 16:01

【摘要】：炎症是对多种有害刺激的防御和保护性反应,过度和不受控制的炎症可以导致局部组织损伤甚至全身性损伤,是多种炎性疾病发病机制的基础。我们前期的研究发现艾纳香油有很好的抗炎活性,然而,其潜在的作用机制还不是很清楚。本文研究目的是初步探讨艾纳香油对脂多糖(LPS)介导巨噬细胞分泌炎性因子的影响及其潜在的作用机制。首先利用气-质联用(GC-MS)法分别对5个黔产的艾纳香油进行分析,确定其主要成分,并采用峰面积归一法计算相对百分含量;通过二甲苯致小鼠耳肿胀试验及过敏性慢反应物质(SRS-A)生成的抑制试验,初步筛选了5个黔产艾纳香油中抗炎活性相对较好的艾纳香油,为后续的研究奠定了物质基础。其次采用MTT法检测抗炎最佳产源的艾纳香油对巨噬细胞的毒性;采用ELISA法检测其对LPS诱导巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_2(PGE_2)和环氧合酶-2(COX-2)的影响;采用紫外分光光度法检测其对LPS致小鼠腹腔巨噬细胞中一氧化氮(NO)的生成和抑制型一氧化氮合酶(iNOS)活力的影响。最后采用qPCR法检测艾纳香油对LPS诱导巨噬细胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2的mRNA相对表达的影响;Western blot法检测艾纳香油对LPS诱导RAW264.7细胞CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相对表达量的影响。实验结果表明5个黔产的艾纳香油中左旋龙脑、反式石竹烯、樟脑、石竹烯氧化物、香树烯、花椒素、芳樟醇含量相对较高,且5个黔产艾纳香油共有成分21种;4个黔产的艾纳香油能显著或极显著减少二甲苯致小鼠耳廓肿胀(P㩳0.05,P㩳0.01),5个黔产的艾纳香油能极显著减少SRS-A生成(P㩳0.01),获得1个抗炎最佳黔产的艾纳香油,该艾纳香油对巨噬细胞的IC_(50)值为254.4μg·mL~(-1),适当浓度的该油能显著或极显著抑制LPS介导的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_2、COX-2、NO及iNOS的活力(P㩳0.05,P㩳0.01),也抑制了CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、iNOS、COX-2 mRNA的表达及CD14、MD-2、TLR4、MyD88、IRAK-1、TAK-1、NF-κBp65、nlrp3的蛋白相对表达量(P㩳0.05,P㩳0.01)。结果提示5个黔产艾纳香油各成分含量不同,且具有不同程度的抗炎作用,抗炎最佳产源的艾纳香油作用机制可能是通过LPS-TLR4信号途径抑制NF-κBp65的磷酸化入核,减少PGE_2的生成抑制iNOS的活性从而减少NO及TNF-α、IL-1β、IL-6的产生与表达;同时也可能通过抑制LPS活化巨噬细胞内的nlrp3炎症小体通路,从而抑制炎症的发生。本课题结果将为黔产艾纳香油进一步抗炎作用机制深入研究提供理论数据参考。
【图文】：

艾纳香

第一章前言艾纳香油研究进展艾纳香 Blumea balsamifera( L.) DC．为菊科艾纳香属植物，主产于热带、亚带地区，是贵州具有地理标志的地道药材，目前贵州艾纳香属植物有假东风草苞艾纳香、千头艾纳香、少叶艾纳香、柔毛艾纳香等 14 个品种[1]。据《现代草纲目》记载，，具有清热明目、祛风止痒、解毒消肿等功效，主治目赤肿痛疹、疥疮、皮肤瘙痒等症[2]。艾纳香挥发油（Blumea balsamifera oill，BBO）艾纳香的叶、枝经提炼得到艾片后的副产物，民间直接将其涂抹于烧伤或烫伤肤，有良好的治疗效果，且不留疤痕，其作为一类次生代谢产物，具有安全毒，无污染等特点，有非常好的开发前景。目前有文献已经报道了艾纳香挥发具有很好的药理活性，本文期对艾纳香挥发油资源开发和利用提供参考价值

脂质A,脂质

十九世纪就被认可，并且主要与革兰氏阴性菌释放。目前主要的内毒素是脂多糖（lipopolys外膜的主要成分，其一般由疏水性脂质 A 结构多糖（O 抗原）组成[39]。单独的脂质 A 部分足产生类似于大肠杆菌脂质 A 的脂质 A 物种，其个酰基链，这种六酰基脂质 A 分子是强有力的子模式，并且是对 LPS 的免疫应答的主要诱导的变化可对脂质 A 的生物活性产生深远影响[40及内皮细胞，诱发宿主的炎症反应，引起细胞释放（如 IL-1β、IL-6、TNF-α），导致全身性炎
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】