左归丸对血管生成体外三维模型的影响及其与卵巢PLGF、Flt-1的关系

发布时间：2020-05-27 16:53

【摘要】：目的:观察高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)监测制备的左归丸含药血清对血管生成体外三维模型及左归丸对雷公藤多苷致卵巢功能低下大鼠卵巢胎盘生长因子(Placenta growth factor,PLGF)及酪氨酸激酶(Fms-like tyrosine kinase,Flt-1)表达的影响,探讨左归丸促进血管生成的作用机制。方法:(1)将45只SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠,220±20g,分为大鼠空白血清组(蒸馏水11g/kg),左归丸浸膏低剂量组(11g/kg)、左归丸浸膏高剂量组(33g/kg)灌胃一次后,于不同时间点采血,制备左归丸含药血清;HPLC监测下选取药物成分峰值最大时间点的含药血清进行人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)体外三维培养;四甲基偶氮唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察左归丸含药血清对HUVEC增殖的影响,I型鼠尾胶原表面培养法建立HUVEC血管生成三维模型。酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清雌二醇(estradiol,E2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平。(2)将40只SD雌性大鼠180±20g,分为空白组(8只)和模型组(32只),模型组予雷公藤多苷片悬浮液50mg/kg灌胃,持续14天,制作卵巢功能低下大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为模型组(蒸馏水20g/kg)、倍美力组(65ug/kg)、左归丸低剂量组(11g/kg)、左归丸高剂量组(33g/kg),灌胃20天,观察各组大鼠动情周期变化,计算卵巢、子宫指数,苏木精-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察卵巢组织形态,免疫组化法及蛋白印迹法(Western blot,WB检测大鼠卵巢组织PLGF及其受体Flt-1的表达情况。结果:(1)左归丸灌胃后2小时达最高药物吸收峰值。左归丸浸膏低剂量组(72h),高剂量组(24h、48h、72h)对HUVEC均有增殖作用(p0.05或p0.01)。左归丸低、高剂量组可增加内皮小管的面积、长度、管径及生成指数(p0.01),可明显提高大鼠血清E2、VEGF水平(P0.05或P0.01)。(2)卵巢功能低下大鼠动情周期紊乱延长,治疗后大鼠动情周期逐渐恢复至正常。与模型组相比,各治疗组的卵巢、子宫指数增高(P0.05或P0.01),各级生长卵泡、黄体及卵巢血管数增多(P0.05或P0.01),闭锁卵泡数量减少(P0.05或P0.01)。各治疗组PLGF、Flt-1累积光密度值及蛋白表达量增高(P0.01)。结论:(1)HPLC监测制备的左归丸含药血清可以促进血管内皮细胞的增殖,改善三维小管结构。(2)左归丸能逐渐恢复雷公藤多苷致卵巢功能低下大鼠动情周期,提高卵巢、子宫指数,改善大鼠卵巢组织形态,增加大鼠卵巢血管数。(3)左归丸可以提高大鼠血清E2、VEGF水平,上调卵巢组织PLGF及Flt-1的表达,促进卵巢血管的生成从而改善卵巢功能。
【图文】：

图 2 左归丸对内皮细胞小管形成的影响(×100)Fig 2 Effect of Zuogui Pill on Tubular Tubular Formation in Endothelial Cells(×100)a.二维培养组；b.三维空白对照组；c.三维左归丸 11g/kg 组；d.三维左归丸 33g/kg 组；三维 VEGF 10ug/L 组a. Two-dimensional culture group；b. Three-dimensional blank control group；c. Three dimensional Zuogui Wan 11g/kg group；d. Three-dimensional Zuogui Wan 33g/kg groupe. Three-dimensional VEGF 10ug/Lgroupa bced

dimensional Zuogui Wan 11g/kg group；d. Three-dimensional Zuogui Wan 33g/kg group；e. Three-dimensional VEGF 10ug/Lgroup图3 大鼠阴道脱落细胞学检测结果（×200）Fig 3 Cytological test results of vaginal exfoliation in rats（×200）a bcd ea bced
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 李朝飞;陈冠军;朱小欢;朱致祥;章秋;鲁云霞;;雌激素治疗保护去卵巢对血管内皮细胞损伤的初步机制[J];安徽医科大学学报;2016年12期

2 应敏丽;徐旭群;王佳曦;;中药调周法对卵巢储备功能下降患者性激素和卵巢动脉血流的影响[J];上海中医药杂志;2016年05期

3 罗玺;李茜;程洁;吕凯露;华启新;夏有兵;;电针预处理对促排卵大鼠卵巢功能及VEGF的影响[J];中国针灸;2016年05期

4 陈振华;刘苏珍;周斌;刘红宁;杨明;;浅谈中药质量标准现状与几种质量评价方法[J];时珍国医国药;2016年03期

5 刘慧萍;刘婵;张国民;谢佳娴;谷旭宇;肖晗;钱琴;;乌鸡白凤丸对衰老血虚大鼠子宫内膜VEGF及其受体表达的影响[J];中华中医药学刊;2015年05期

6 高星;杜惠兰;田茜华;班光国;贾云波;孙晓换;谷向向;;补肾法、疏肝法对超促排卵大鼠子宫内膜组织形态及血管生成的影响[J];中医杂志;2015年09期

7 程吉东;温淑云;杨大男;;乙葵冲剂对雷公藤致雌鼠生殖系统毒性的预防作用[J];山东医药;2014年39期

8 王志强;倪亚莉;柴三明;;卵泡液促血管生成因子在卵泡发育中的作用的研究进展[J];现代妇产科进展;2014年10期

9 李莉;张蓓;张丽美;李安;;补肾活血调周法对卵泡黄素化不孕患者的卵泡质量影响[J];中医临床研究;2014年21期

10 杜秀雅;马华刚;;血管新生相关因子对卵泡生长发育影响的研究进展[J];中国计划生育学杂志;2014年07期

相关博士学位论文 前1条

1 许小凤;补肾活血法对卵巢储备功能低下干预的效应机理研究与临床证治探讨[D];南京中医药大学;2010年

相关硕士学位论文 前4条

1 甘陈菲;四逆散加味对抗肝纤维化大鼠磷酸化SMAD、PDGF-BB和其受体调节作用的研究[D];河南中医学院;2014年

2 彭绍霞;中药周期疗法对促排卵周期子宫内膜容受性的影响[D];广州中医药大学;2012年

3 钟伟萍;补肾活血汤治疗心因性卵巢功能减退的临床研究[D];南京中医药大学;2011年

4 陆君;补肾法、疏肝法对排卵障碍模型大鼠卵巢血液供应的比较研究[D];河北医科大学;2010年

，

本文编号：2683842