α-常春藤皂苷通过干预非小细胞肺癌有氧糖酵解而抑制肿瘤生长的实验研究

发布时间：2020-05-27 20:07

【摘要】：目的:研究白头翁皂苷有效成分α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌糖酵解的干预作用及其作用机制,以阐明α-常春藤皂苷抗肿瘤的作用机制,为后续研究奠定基础。第一部分α-常春藤皂苷对人肺癌细胞增殖的影响方法:体外培养人肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460细胞、给α-常春藤皂苷进行干预,采用CCK8细胞增殖-毒性实验研究α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549、NCHI292、NCHI460细胞的增殖的影响;采用平板克隆形成实验,研究白头翁皂苷有效成分α-常春藤皂苷的对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖的影响。结果:CCK8结果显示α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460细胞具有较好的体外抑制作用,α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549、NCI-H292、NCI-H460细胞的半效抑制浓度(IC_(50))值分别为9.53μg/ml、12.52μg/ml、12.86μg/ml;平板克隆形成实验结果显示α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549细胞良好的抑制作用,且呈现良好的剂量依赖关系。第二部分α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549细胞糖酵解的干预作用及其机制研究方法:体外培养非小细胞肺癌A549细胞,给予α-常春藤皂苷进行干预,采用试剂盒检测细胞培养液中葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量;采用Western Blot法检测细胞中糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4及糖酵解调控因子c-Myc、HIF-1α、p53、Akt表达量;c-Myc抑制剂联合α-常春藤皂苷进行干预后,采用Western Blot法检测细胞中糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表达。结果:生化试剂盒测试结果显示,与空白组相比,α-常春藤皂苷能显著降低A549肿瘤细胞对葡萄糖的摄取(P0.05),增加乳酸的生成(P0.05),降低细胞内三磷酸腺苷的含量(P0.05);Western Blot结果显示,α-常春藤皂苷显著下调糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4、c-Myc、HIF-1α等关键酶及调控因子的表达;c-Myc抑制剂联合α-常春藤皂苷进行干预后糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表达与单用c-Myc抑制剂及α-常春藤皂苷比较,出现一定程度的下调。第三部分α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其作用机制方法:建立人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠异体移植瘤模型,α-常春藤皂苷干预后,通过测量瘤重及瘤体积观察α-常春藤皂苷对肿瘤的抑制作用;采用生化试剂盒检测肿瘤组织中葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量;采用免疫组化的方法测定移植瘤中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4等关键酶及转运蛋白的表达。结果:裸鼠异体移植瘤结果显示,α-常春藤皂苷给药组对非小细胞肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用显著(P0.05);葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)及细胞内三磷酸腺苷(ATP)试剂盒结果显示,α-常春藤皂苷5 mg/kg剂量组及10 mg/kg剂量组肿瘤组织中LD及ATP的含量显著降低(P0.05),GLU含量显著升高(P0.05);免疫组化结果显示,α-常春藤皂苷给药后,移植瘤中GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4等关键酶及转运蛋白表达显著下调。结论:α-常春藤皂苷在体内及体外通过抑制非小细胞肺癌A549糖酵解水平从而抑制其生长,其机制为α-常春藤皂苷可能通过抑制c-Myc及HIF-1α而抑制其下游GLUT1、HK2、PKM2、LDHA、MCT4的表达,经验证,α-常春藤皂苷可通过作用于c-Myc而抑制肿瘤糖酵解,其通过影响HIF-1α而抑制肿瘤糖酵解的作用有待进一步验证。
【图文】：

图 1。 1 α-常春藤皂苷对人肺癌细胞增殖的影响（ ± , n=5hibitory effect of α-Hederin on proliferation in human lung（ ± , n=5）浓度 A549 抑制率 NCI-H460 抑制率 NCI-H 100.00% ± 0.00% 100.00% ± 0.00% 100.00 95.33% ± 5.03% 86.25% ± 6.12% 85.64% 59.33% ± 7.64% 56.65% ± 7.24% 50.97% 54.00% ± 2.00% 38.54% ± 3.58% 38.74%42.00% ± 2.34% 25.65% ± 5.87% 28.32%37.33%±7.64% 24.53%±6.56% 20.750.00% ± 0.00% 0.00% ± 0.00% 0.00%

植瘤裸鼠瘤重及瘤体积结果显示，与模型组比较，各给药移植瘤瘤体积及瘤重抑制作用明显（P<0.05），α-常春藤皂苷 5 mg/kg 抑瘤率分别为 40%，，24%，详见表 2，图 1，常春藤皂苷对非小细胞肺癌 A549 裸鼠异体移植瘤瘤体积 1 Effect of α-Hederin on Tumor Volume of Non-small Cell A549 Transplantable Tumorsmm3
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 罗颖颖;陈兰英;简晖;崔亚茹;谢欣序;刘鹏;杨世林;郭建生;;白头翁皂苷调节Bel-7402人肝癌异体移植瘤裸鼠能量代谢的研究[J];中草药;2014年07期

2 王天晓;时小燕;丛悦;张中庆;刘迎滑;;薯蓣次苷A通过下调STAT3及糖代谢相关基因表达抑制MCF7细胞生长[J];药学学报;2013年09期

3 王若仲;沈新南;施冬云;刘珊林;;叶黄素对人肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机制研究[J];营养学报;2012年04期

4 刘梅毅;杨永秀;欧靖华;;缺氧对宫颈癌Hela细胞缺氧诱导因子-1α、葡萄糖转运蛋白-1表达的影响及与细胞增殖的关系[J];兰州大学学报(医学版);2012年01期

5 邢国辉;冯玉光;宗绪山;吴美英;朱芸;;丹参酮ⅡA联合5-FU对低氧下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α和突变型P53表达的关系[J];世界华人消化杂志;2010年03期

6 韩保卫;刘光辉;董帅军;韩鸿彬;刘帅峰;许震;张练;;草氨酸盐对胰腺癌细胞糖代谢和线粒体膜电位的影响[J];新乡医学院学报;2009年05期

本文编号：2684068