滇产7种重楼属药用植物主要成分含量分析及止血、镇痛药效学研究

发布时间：2020-05-27 23:53

【摘要】：【目的】采用正交试验优化南重楼中4种重楼皂苷的超声提取工艺;采用HPLC法测定滇产7种重楼属药用植物中4种重楼皂苷的含量及可见分光光度法测定重楼中总皂苷的含量。通过改良寇氏法测定南重楼的LD50;比较滇产7种重楼属药用植物的止血、镇痛作用,为扩大资源提供依据。【方法】采用正交试验,以4种重楼皂苷含量为指标,考察提取溶剂的单次料液比、单次提取时间、初始提取温度、提取次数等因素的影响,优化超声提取工艺;采用HPLC法测定滇产7种重楼属药用植物中4种重楼皂苷的含量及可见分光光度法测定其总皂苷的含量。采用改良寇氏法测定南重楼的半数致死量(LD50);取雄雌各半昆明种小鼠160只,体重18~22g,随机分组16组,各组分别为正常组、重楼高、低剂量组(2g/kg、1g/kg)、阳性药云南白药组(0.667g/kg);以上各组分别给予各受试物1次/d,连续7d,采用毛细管法和断尾法分析观察受试药的止血作用。取雄雌各半昆明种小鼠170只,体重18~22g,随机分组17组,各组分别为正常组、模型用药组、模型阳性药组、模型组;采用肝素和华法林小鼠模型研究重楼的凝血途径。取雄雌各半昆明种小鼠160只,体重18~22g,随机分组16组,各组分别为正常组、重楼高、低剂量组(2g/kg、1g/kg)、阳性药阿司匹林组(20mg/kg);采用醋酸扭体法分析观察受试药的镇痛作用。【结果】南重楼中4重楼皂苷的最佳提取工艺为15倍的溶媒,每次提取20min,初始提取温度为40℃,提取3次;所考察因素中提取次数对重楼皂苷的提取率影响最大,其次为初始提取温度、甲醇单次液料比、单次提取时间。4种重楼皂苷的总含量最高为长柱重楼1.649%,南重楼次之为1.457%,多叶重楼为0.902%,黑籽重楼为0.306%,滇重楼为0.261%;而大理重楼的总含量最低为0.125%,其次为毛重楼0.175%;总皂苷含量最高为长柱重楼47.991mg/g,滇重楼的总皂苷含量为32.789mg/g次之,其次为大理重楼的32.617mg/g,南重楼的为30.215mg/g,黑籽重楼的为13.340mg/g;总皂苷含量最低的为毛重楼的4.722mg/g,其次是多叶重楼的12.289mg/g。通过改良寇氏法计算得出南重楼醇提物的LD50为10.5g/kg;由毛细管法和断尾法可知:1g/kg组对BT的作用效果:滇重楼长柱重楼大理重楼多叶重楼毛重楼南重楼黑籽重楼;2g/kg组对BT的作用效果:滇重楼长柱重楼南重楼多叶重楼黑籽重楼毛重楼大理重楼;1g/kg组对CT的作用效果:滇重楼毛重楼南重楼大理重楼黑籽重楼长柱重楼多叶重楼;2g/kg组对CT的作用效果:滇重楼大理重楼南重楼毛重楼多叶重楼黑籽重楼长柱重楼;肝素和华法林小鼠模型结果表明,重楼的高、低剂量组均能不同程度的缩短由肝素和华法林造成的凝血功能障碍小鼠的APTT、PT时间。醋酸扭体法结果表明,1g/kg组对镇痛的作用效果:滇重楼南重楼大理重楼长柱重楼黑籽重楼多叶重楼毛重楼,2g/kg组对镇痛的作用效果:滇重楼柱重楼南重楼大理重楼黑籽重楼多叶重楼毛重楼。【结论】最优提取方法可行,重复性好,稳定可靠,可用于南重楼中4种重楼皂苷的提取;含量测定方法线性关系良好,操作简单,重复性好,稳定可靠,可用于测定重楼的含量。南重楼具有低毒,且滇产7种重楼属药用植物均有一定的止血、镇痛作用;可初步推断重楼的止血途径为共同凝血途径,即内源性凝血途径和外源性凝血途径共同参与的过程。
【图文】：

图 1-1 混合对照品溶液及样品溶液的高效液相色谱图A 混合对照品；B 样品；1 重楼皂苷 VI；2 重楼皂苷 VII；3 重楼皂苷 II；4 重楼皂苷 I2.1.2 标准曲线的绘制按 1.3.4.2 测定，以进样量(X, μg)为横坐标、峰面积 Y 为纵坐标得出重楼皂苷 I、II、VI、VII 的线性回归方程分别为：YI=366.44XI+3.07，，(r=0.999 9)；YII=377.60XII+2.42，(r=0.999 9)；YVI=340.35XVI+1.63，(r=0.999 9)；YVII=344.22XVII+0.37，(r=0.999 9)，表明重楼皂苷 I、II、VI、VII 在 0.64~12.80μg、0.46-9.20μg、0.26~5.20μg、0.23~4.60μg 范围内线性关系良好。2.1.3 精密度试验连续进样 5 次，重楼皂苷 I、II、VI、VII 峰面积的 RSD 分别为 2.38%、2.06%、2.17%、2.10%，表明该方法精密度良好。2.1.4 稳定性考察按 1.3.4.4 操作，重楼皂苷 I、II、VI、VII 峰面积的 RSD 分别为 2.02%、2.71%、

大理大学硕士学位论文 滇产 7 种重楼属药用植物主要成分含量分析及止血、镇痛药效学研究置 10ml 容量瓶中定容，过滤，备用。2.1.3 方法学考察[20]2.1.3.1 色谱条件根据药典方法[21]进行适当的调整，色谱柱为 AgilentC-18 柱(4.6mm×250mm，5μm)，检测波长为 203nm，柱温 25℃；流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~14min，30%~40%A；14~40min，40%A；40~70min，40~60%A)，流速为 0.9ml/min，进样量 5μl。理论塔板数按重楼皂苷 I、II、VI、VII 计算均不低于 10 000。见图 1-2。
【学位授予单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R284

【参考文献】

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本文编号：2684348