薯蓣皂苷对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响及机制探讨

发布时间：2020-05-28 07:07

【摘要】：目的:研究中药山药有效成分薯蓣皂苷(Dioscin,DIO)对MC3T3-E1成骨细胞增殖活性和成骨性分化的影响,确定最佳活性浓度及处理时间。通过检测β-catenin,runx2,Cyclin D1的转录水平及翻译水平,探讨薯蓣皂苷影响MC3T3-E1细胞增殖分化的作用机理。方法:1.通过荧光倒置显微镜观察对数生长期MC3T3-E1细胞形态。2.不同浓度(1,0.1,0.01,0.001,0μM)DIO分别处理细胞24h、48h、72h,MTT法检测DIO作用不同时间对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响,分析促增殖能力的活性浓度及最佳时间。DIO分别作用细胞最佳时间后,碘化丙啶染色,应用流式细胞技术检测细胞周期,Real-time PCR检测成骨细胞增殖相关基因Ki67、PCNA mRNA的表达。3.不同浓度(1,0.1,0.01,0.001,0μM)DIO处理细胞15d,磷酸苯二钠法检测DIO对细胞内碱性磷酸酶ALP活性的影响,处理细胞21d,茜素红染色检测DIO对成骨细胞矿化结节的影响。Real-time PCR检测DIO处理细胞48h对成骨细胞分化标志物BGP、OPN m RNA表达的影响。4.Real-time PCR法检测活性浓度(0.01,0.001μM)DIO处理MC3T3-E1细胞48h后β-catenin,runx2,Cyclin D1的转录水平。5.活性浓度(0.01,0.001μM)DIO处理MC3T3-E1细胞48h后,Western-blot法检测蛋白β-catenin,runx2,Cyclin D1的表达水平。结果:1.MTT法检测结果显示,0.01,0.001μM浓度组的DIO在作用24h、48h后,均能促进成骨细胞增殖(P0.05),作用48h促增殖效果较强。流式细胞技术检测结果显示,0.01,0.001μM浓度组的DIO作用成骨细胞48h后,能够显著增加细胞周期S期的比例(P0.05)。2.Real-time结果显示,0.01μM DIO减少Ki67 m RNA的表达(P0.01),而0.001μM DIO增加Ki67 m RNA的表达(P0.05);各浓度的DIO对PCNA基因的转录无明显影响(P0.05)。3.DIO处理细胞15d后,ALP活性检测结果显示,0.01,0.001μM浓度组的DIO显著提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性(P0.01)。作用21d后,茜素红染色结果显示,0.01,0.001μM浓度组的DIO提高成骨细胞矿化结节量(P0.001)。4.Real-time PCR结果显示BGP,OPN基因的转录水平提高(P0.05)。5.Real-time PCR结果显示,(0.01,0.001μM)DIO runx2,Cyclin D1 m RNA的转录(P0.01),降低β-catenin m RNA的转录(P0.001)。6.Western-blot结果显示,转录水平发生改变的基因β-catenin,runx2,Cyclin D1的翻译水平均下降(P0.05)。结论:薯蓣皂苷具有促进MC3T3-E1细胞增殖及成骨性分化的作用,并能够促进成骨细胞骨基质的钙化。其中以0.01μM及0.001μM的薯蓣皂苷作用最为明显。薯蓣皂苷可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞的增殖和分化。
【图文】：

形态图,细胞形态,形态

MC3T3-E1细胞形态（100X）

细胞形态,细胞增殖,细胞

15图 2 MC3T3-E1 细胞形态（200X）Fig. 2 Morphology of MC3T3-E1 cells MC3T3-E1 细胞增殖的影响 DIO 作用 MC3T3-E1 细胞 24h 后，与 0μM 对照组相比，，0.1μ 浓度的 DIO 均能显著促进 MC3T3-E1 细胞增殖活性（P＜0.01）细胞增殖（P＜0.001）；不同浓度 DIO 作用 MC3T3-E1 细胞 48比， 0.01μM、0.001μM 浓度的 DIO 均能显著促进 MC3T3-E
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】