基于康复新液对肝纤维化模型大鼠的影响探究中医肝络病理论

发布时间：2020-05-28 09:49

【摘要】：研究目的:1.研究肝纤维化中医肝络病理论;2.研究肝纤维化与康复新液“血瘀络阻-通利血脉”证治关系理论;3.以CCl_4肝纤维化模型大鼠为对象研究康复新液抗肝纤维化作用及机制,一定程度上为肝纤维化中医肝络病的理论认识和康复新液用于抗肝纤维化提供实验室依据。研究方法:1.理论研究:(1)通过中医肝络病与肝纤维化相关性的研究,提出肝纤维化的中医肝络病理论认识;(2)通过复习康复新液研究进展,提出肝纤维化与康复新液“血瘀络阻-通利血脉”证治关系的理论认识。2.实验研究:(1)采用大鼠腹腔注射CCl_4油剂(CCl_4∶橄榄油=2∶3)建立肝纤维化大鼠模型;(2)肉眼观察大鼠一般体征;(3)HE染色法观察肝脏病理形态学改变,Masson染色法观察肝脏组织胶原纤维改变;(4)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肝功能血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)与肝纤维化血清生物学标志物透明质酸(Hyaluronan,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(typeⅢprocollagen amino peptide,PⅢNP)、IV型胶原(Collagen IV,ColIV)和羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp);(5)免疫组化法检测肝纤维化肝组织生物学标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅲ型胶原(typeⅢCollagen,ColⅢ)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1);(6)Western Blot检测肝组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、β-catenin、Axin和糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase3β,GSK-3β)。研究结果:1.康复新液抗肝纤维化作用评价:(1)一般体征:正常对照组大鼠毛色光泽,体格健壮,精神状态良好,食欲佳。其余造模组大鼠随着造模时间推进,毛色萎黄欠光泽,精神状态欠佳,喜静蜷卧,饮食减少,时有大便溏泄。(2)肝组织病理学:HE染色法结果显示:正常对照组大鼠肝组织结构完整,肝小叶结构清晰,小叶内肝细胞索排列较整齐,肝细胞大小均匀,无变性、坏死,胞核与胞质清晰可见,汇管区未见纤维组织增生和小胆管增生;模型对照组大鼠肝小叶结构不清,甚至破坏,肝细胞排列紊乱,肝细胞弥漫脂肪变性,汇管区结缔组织增生,纤维间隔形成,纤维组织增生明显,中央静脉区可见明显瘀血;与模型对照组相比,阳性对照组和康复新液各剂量组上述病变改善。Masson染色法结果显示:模型组肝小叶周边、汇管区和中央静脉周围可见大量蓝色胶原纤维;与模型对照组相比较,阳性对照组和康复新液各剂量组胶原纤维明显减少。(3)肝功能血清生化指标:ELISA检测血清AST、ALT,结果显示:与模型对照组相比较,阳性对照组和康复新液各剂量组血清AST、ALT活性明显降低;(4)肝纤维化血清生物学标志物:ELISA检测血清HA、LN、ColIV、PⅢNP、HyP,结果显示:与模型对照组相比较,阳性对照组和康复新液各剂量组明显降低;(5)肝纤维化肝组织生物学标志物:免疫组化结果显示:与模型对照组相比较,阳性对照组和康复新液各剂量组α-SMA、ColⅢ、TIMP-1明显减少。2.康复新液抗肝纤维化机制:Western Blot检测TGF-β1、Smad3、Axin、GSK-3β和β-catenin,结果显示:与模型对照组相比较,阳性对照组和康复新液各剂量组TGF-β1、Smad3和β-catenin表达明显降低,Axin和GSK-3β表达明显增加。研究结论:1.理论研究:肝纤维化的中医病机:湿热疫毒入侵,正气亏虚,气虚血瘀,终致湿毒瘀互结,入肝滞络,属中医肝络病。2.实验研究:(1)CCl_4肝纤维化大鼠肝脏病理形态学、肝纤维化血清和肝组织生物学标志物及信号通路关键蛋白等病理学、生物学指标一定程度上佐证肝纤维化中医肝络病的理论认识。(2)康复新液可改善CCl_4肝纤维化模型肝小叶结构不清甚至破坏,减轻纤维结缔组织增生;降低肝功能血清生化指标AST和ALT的活性;降低肝纤维化血清生物学标志物HA、LN、ColIV、PⅢNP、HyP以及肝组织生物学标志物α-SMA、ColⅢ、TIMP-1,改善CCl_4模型大鼠肝纤维化。(3)康复新液可能通过下调TGF-β1、Smad3和β-catenin,上调Axin和GSK-3β,发挥改善CCl_4模型大鼠肝纤维化的作用。
【图文】：

图 1 ALT、AST 标准曲线表 2 康复新液对 CCl4肝纤维化模型大鼠血清 ALT、AST 活性的影响（mIU/mL）（ x ±s）组别 n ALT ASTControl 6 41.01±0.81 40.38±0.56Model 6 65.75±3.07 ** 69.47±2.41 **KFX-LD 6 53.89±2.94 **## 52.64±4.06 **##KFX-MD 6 56.09±4.69 **## 54.28±2.82 **##KFX-HD 6 53.72±2.30 **## 53.49±3.54 **##COL 6 54.57±2.84 **## 53.08±4.03 **##

图 1 ALT、AST 标准曲线表 2 康复新液对 CCl4肝纤维化模型大鼠血清 ALT、AST 活性的影响（mIU/mL）（ x ±s）组别 n ALT ASTControl 6 41.01±0.81 40.38±0.56Model 6 65.75±3.07 ** 69.47±2.41 **KFX-LD 6 53.89±2.94 **## 52.64±4.06 **##KFX-MD 6 56.09±4.69 **## 54.28±2.82 **##KFX-HD 6 53.72±2.30 **## 53.49±3.54 **##COL 6 54.57±2.84 **## 53.08±4.03 **##
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

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本文编号：2685063