柚皮素在调节巨噬细胞内质网应激ATF6活性以及胆固醇流出中作用的研究

发布时间：2020-05-28 17:11

【摘要】：目的:柚皮素可改善脂蛋白谱,防止心血管疾病。ATF6是一种内质网应激传感器,与胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)具有相同的激活过程。临床数据显示ATF6水平与血浆胆固醇水平相关。本研究主要分析柚皮素是否参与调节胆固醇流出并测试柚皮素相关作用与内质网应激ATF6的联系。方法:1、对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)和单核细胞(THP-1)进行体外培养,以80μg/ml的oxLDL或荧光标记胆固醇诱导,并以不同浓度(10,25,50 μM)的柚皮素处理RAW264.7和THP-1细胞,用荧光定量酶标仪检测胆固醇流出情况,荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot检测相关蛋白质的表达情况;柚皮素作用于经内质网应激诱导剂衣霉素(TM),抑制剂4-苯基丁酸(PBA)或ATF6特异性siRNA处理的RAW264.7和THP-1细胞,Western blot检测相关蛋白质的表达情况;柚皮素作用于经PI3K抑制剂LY294002处理的RAW264.7细胞,Western blot检测相关蛋白质的表达情况。2、将8周龄的ApoE-A小鼠随机分为四组,并进行如下处理:正常饮食组(ND)、高脂模型组(HFD)、柚皮素组(HFD+柚皮素 100mg/kg/day)、TM 组(HFD+柚皮素 100mg/kg/day+TM,5 mg/kg/day)。柚皮素通过灌胃给药,TM进行腹腔注射,处理结束后分别用荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测相关蛋白质的mRNA和蛋白含量。并对小鼠心脏进行病理分析。结果:1、结果显示柚皮素增强apoA-I和rHDL通道介导的胆固醇流出并且使RAW264.7巨噬细胞中ABCA1、ABCG1和LXRα基因表达上调。柚皮素抑制游离ATF6向核内转移并抑制靶基因GRP78和XBP-1的表达;最终表明柚皮素促进胆固醇流出的功能是通过抑制内质网应激ATF6途径介导的。柚皮素可促进Akt磷酸化,PI3K抑制剂LY294002处理增加了核内ATF6表达并减少由柚皮素增强的胆固醇流出和ABCA1表达。2、结果显示经柚皮素处理的HFD-ApoE-/-小鼠的原代腹腔巨噬细胞胆固醇流出能力比仅HFD的小鼠增加了 1.5倍以上。TM处理又显著降低了这种胆固醇流出能力的增加。柚皮素可降低主动脉和腹腔巨噬细胞的核内ATF6、GRP78和XBP-1表达水平,并减少主动脉根部的动脉粥样硬化病变,这一作用可被TM逆转。这些证实了内质网应激ATF6与柚皮素促进胆固醇流出的作用密切联系。结论:柚皮素可以调节胆固醇流出,并且调节是由内质网应激ATF6分支和PI3K/Akt通路介导的。
【图文】：

柚皮素,巨噬细胞

胞中的表达。结果表明，三种基因的表达均在ＴＭ的作用下升高，但在ＴＭ与柚逡逑皮素共同处理时，表达逆转降低，这证明柚皮素可以调节ＲＡＷ２６４．７细胞的内质逡逑网应激ＡＴＦ６通路（图２邋—３Ａ，Ｂ）。其次，本文研宄了柚皮素在ＰＢＡ或ＴＭ存在逡逑的情况下对胆固醇流出及其相关基因表达的影响。结果显示，在ＰＢＡ与柚皮素逡逑共同处理的细胞中参与胆固醇流出的ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＧ１和ＬＸＲａ基因的表达显著逡逑上调了，，而与仅柚皮素处理的ＲＡＷ２６４．７细胞相比，柚皮素与ＴＭ共同处理的细逡逑胞中上述基因的表达明显降低（图２邋—３Ｃ）。与Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ结果一致，ＴＭ处逡逑理的ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞屮胆固醇流出减少了邋８１邋％，而柚皮素纠正了这种减少，逡逑其流出率提高了邋６．８倍，结果与对照组细胞相当（图２邋—邋３Ｄ）。在平行实验中，逡逑测试了柚皮素对人类ＴＨＰ－１细胞形成的巨噬细胞的影响。如预期所示，ＡＢＣＡ１、逡逑ＡＢＣＧ１和ＬＸＲａ的表达可由ＰＢＡ诱导上调，而被ＴＭ抑制下调（图２邋—３Ｅ）。此逡逑夕卜

柚皮素在调节巨噬细胞内质网应激ATF6活性以及胆固醇流出中作用的研究

图２邋—邋３１）
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

【参考文献】