甘草酸或甘草次酸配伍依托泊苷对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞作用的差异及其机制初步研究

发布时间：2020-05-28 17:43

【摘要】：实验背景与目的三阴性乳腺癌的雌激素受体,孕激素受体与人表皮生长因子受体2表达阴性,缺乏治疗靶点,恶性程度高,目前临床上缺乏有效的用药与治疗指南,治疗预后较差而死亡率高。甘草酸临床应用广泛,其在人体内被代谢脱去两分子葡萄糖成为甘草次酸。有研究表明甘草酸与甘草次酸均能抑制肿瘤生长,也有报道在抗肿瘤与抗氧化方面其药理作用相反;但两者对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞作用的差异以及相关药理学机制却未见有报道。因此,本课题考察了甘草酸和甘草次酸对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞体外生长的影响并初步探索相关的作用机制。实验方法与结果MTT实验发现甘草酸与甘草次酸对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖作用不同。甘草次酸能够抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖;在非细胞毒浓度范围内(20μM以下),甘草次酸联用抗肿瘤药物依托泊苷可表现出协同作用。通过RT-PCR与Western blot实验发现,甘草次酸能够调节拓扑异构酶Ⅱα蛋白(TOPO 2A)的表达,该蛋白同时也是依托泊苷的作用靶点。非细胞毒浓度的甘草次酸对MDA-MB-231细胞TOPO 2A的调节作用为浓度与时间依赖性。20μM甘草次酸刺激12小时后细胞TOPO 2A蛋白的表达,与对照组相比上调2.4倍,增加了依托泊苷的作用靶点,使药物杀伤作用增强。有趣的是,刺激延长至48小时时,甘草次酸反而抑制TOPO 2A蛋白,其表达水平为对照组的0.5倍。同时,20μM甘草次酸能够损耗细胞内谷胱甘肽,降低细胞抵抗氧化应激的能力,诱导细胞凋亡,进一步增强了甘草次酸对依托泊苷的协同作用。另一方面,甘草酸在0-80μM范围内不能影响MDA-MB-231细胞的体外生长也不能增强依托泊苷对肿瘤细胞的杀伤作用。与甘草次酸相反,20μM浓度以下的甘草酸不影响TOPO 2A的表达以及细胞凋亡状态,同时能降低细胞内的活性氧,提高细胞的抗氧化能力。在细胞通路水平考察发现,甘草酸与甘草次酸发挥药理学作用可能与其参与调节MAPK与AKT通路相关。实验结论甘草次酸而不是甘草酸,能够抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖作用,且能够配伍联用依托泊苷发挥协同作用。甘草酸与其代谢产物甘草次酸对肿瘤作用差异性及甘草次酸和依托泊苷的协同作用可能与调控拓扑异构酶Ⅱα的蛋白表达,细胞凋亡以及氧化应激有关。
【图文】：

０．０５；邋ｎ＝３逡逑本实验中，如图１邋（Ａ）所示，，甘草酸浓度在０－８０ｐＭ刺激细胞２４与４８小逡逑时对细胞生长基本不造成影响（Ｐ＞0．邋０５）。如图１邋（Ｂ）所示，甘草次酸能时逡逑１０逡逑

图２－１邋（Ａ）邋２０［ｊ邋Ｍ甘草酸与０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷联用对ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞体外生长的逡逑影响；图２－１邋（Ｂ）邋２０｜＾Ｍ甘草次酸与０．邋６２５－７．邋５＾Ｍ的依托泊苷联用对ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞体逡逑外生长的影响；ｎ多３逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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1 Shikha Snigdha;Erica D Smith;G Aleph Prieto;Carl W Cotman;;Caspase-3 activation as a bifurcation point between plasticity and cell death[J];Neuroscience Bulletin;2012年01期

2 陆炜强;傅承新;赵云鹏;;鬼臼毒素生物合成研究进展[J];中国中药杂志;2011年09期

3 高宇勤;吴杰;江仁望;赵国平;;当归四逆汤中肉桂酸及甘草酸在大鼠血清中含量测定及药动学研究[J];中药材;2011年03期

4 杨静,彭仁t,孔锐,于皆平;18α-甘草酸二铵对大鼠肝脏细胞色素P450和II相酶的影响[J];药学学报;2001年05期

本文编号：2685597