红花中羟基红花黄色素A的提取及对肝癌细胞的抑制作用

发布时间：2020-05-29 08:08

【摘要】：目的羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是天然药物红花(Carthamus tinctorius L)药理功效中最有效的水溶性化合物。在临床研究及治疗上具有广泛的应用。对HSYA的提取研究已经很成熟,在前人的研究基础上,本文采用闪式提取技术提取HSYA,并通过单因素试验方法确定各提取因素的适宜范围,再利用正交试验最终确定闪式提取技术提取HSYA的最佳工艺条件,为后续实验提供基础。HSYA对多种肿瘤细胞的生长都有一定的抑制效果,通过HSYA对人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的作用,研究HSYA对肝癌细胞生长、侵袭、迁移、细胞周期与凋亡情况,以及其对蛋白表达的影响。方法采用闪式提取技术提取红花中的HSYA,用高效液相色谱法(HPLC)测定HSYA的含量;并以HSYA的提取含量为指标,通过单因素试验分别考察HSYA提取时最佳料液比、提取的时间和提取时电压的适宜范围,再利用正交试验确定HSYA闪式提取法的最佳提取工艺。分别用0 mg/mL(空白对照组)、0.5 mg/mL(低剂量组)、1 mg/mL(中剂量组)、1.5 mg/mL(高剂量组)的HSYA作用于人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞,采用MTT法检测HSYA对肝癌细胞增殖作用的影响;采用Transwell法检测HSYA对肝癌细胞的迁移能力及侵袭能力的影响;采用流式细胞术测定HSYA对肝癌细胞周期及细胞凋亡情况的影响;采用免疫印迹法(western blot)分析肝癌细胞中VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白经HSYA干预后的表达结果。结果(1)闪式提取法提取HSYA的最佳工艺为料液比1:40 g/mL,提取时间3 min,提取时电压80 V。(2)MTT实验结果显示,与空白剂量组比较HSYA可以抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性(P0.05);(3)Transwell法实验结果显示,随着HSYA浓度的增加,细胞的侵袭和迁移能力逐渐降低,HSYA可抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的侵袭和迁移(P0.05);(4)流式细胞术测定结果显示,随着HSYA浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,细胞G_0/G_1期比例显著增加(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05),HSYA可以促进肝癌细胞的凋亡;(5)Western blot分析显示,HSYA还可以使VEGF、PI3K、AKT及Snail蛋白表达下降(P0.05)。结论闪式提取HSYA工艺简单,提取率高,可以用于红花中HSYA的提取。同时HSYA能抑制人肝癌SMMC-7721和HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,使其停留在G_0/G_1期,诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/Snail信号通路的激活有关,为HSYA治疗肝癌的临床应用提供理论依据。
【图文】：

红花红花易种植，喜温暖干燥的气候，，抗寒及耐贫能力强

羟基红花黄色素A的化学结构
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2686654