精氨酸甘草甜素盐对大鼠胆汁淤积型肝纤维化的影响

发布时间：2020-05-29 09:40

【摘要】：目的探讨精氨酸甘草甜素盐(glycyrrhizin arginine salt GLY-ARG)对大鼠胆汁淤积型肝纤维化的影响。方法1体内实验:将50只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为对照组、模型组、精氨酸组、精氨酸甘草甜素盐大剂量组和小剂量组。模型组、精氨酸组、精氨酸甘草甜素盐大、小剂量组给予肝总管结扎手术,精氨酸甘草甜素盐大、小剂量组在胆总管结扎第二天分别给精氨酸甘草甜素(0.15g/kg/d、0.075g/kg/d)灌胃,精氨酸组给予精氨酸(0.15g/kg/d)灌胃,对照组、模型组给予同等剂量的生理盐水灌胃,观察大鼠的一般状况,并每天测量体重1次,持续14天后,处死动物留取样本,称取肝重量,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、8-异前列腺素、丙二醛(MDA)以及肝组织羟脯氨酸含量,HE染色观察肝脏病理变化,Masson染色观察肝纤维化程度,免疫组化染色观察肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,免疫荧光染色检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,Western blot方法检测肝组织基质金属蛋白酶2和9(MMP2和MMP9)、核因子-k(p-NF-k B,NF-k B)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达水平,探讨精氨酸甘草甜素盐对胆汁淤积型大鼠肝纤维化的影响。2体外实验:利用培养的Hep G2、LX-2细胞系、大鼠肝原代细胞和肝星状细胞。首先将Hep G2细胞、LX-2细胞、原代培养肝细胞和原代肝星状细胞分为对照组、模型组、精氨酸组和精氨酸甘草甜素盐组,MTT法检测精氨酸甘草甜素盐对胆汁刺激后Hep G2细胞和肝原代细胞增殖的影响、Western blot检测精氨酸甘草甜素盐对TGF-β1刺激后LX-2细胞和大鼠肝星状细胞(HSC)中TGF-β1、α-SMA、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果与模型相比,精氨酸甘草甜素盐组大鼠生长较快,肝重量和体重的比率明显降低。HE和马松染色显示,精氨酸甘草酸组大鼠肝纤维化明显减轻,肝脏羟脯氨酸含量、胆汁盐池减小、血清总胆红素、ALT、AST、8-异前列腺素和MDA含量明显降低,HE和马松染色显示精氨酸甘草酸组大鼠肝纤维化程度明显减轻,免疫组化和免疫荧光检测显示:精氨酸甘草甜素能显著降低胆汁淤积型纤维化大鼠肝组织TGF-β1、α-SMA表达水平,Western blot结果显示精氨酸甘草甜素盐组大鼠肝组织MMP-2、MMP-9)、p-NF-KB、NF-KB、TNF-α、TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调。体外实验结果显示:精氨酸甘草甜素盐可明显改善胆汁对Hep G2细胞和原代肝细胞的损伤,并呈明显的剂量依赖性。Western blot结果显示:精氨酸甘草甜素盐组可下调TGF-β1诱导LX-2细胞和大鼠原代肝星状细胞纤维化相关蛋白TGF-β1、α-SMA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论精氨酸甘草甜素盐可明显减轻大鼠胆汁淤积型肝纤维化程度,其机制可能与其抑制肝星状细胞激活、减轻氧化应激反应和炎症反应,促进胶原纤维降解,进而抑制肝纤维化的进展有关。
【图文】：

生长曲线,生长情况,甘草甜素,生长曲线

G: glycyrrhizin arginine salt; *p< 0.05 vs. Cormal group; # p < 0.05vs. 甘草甜素盐对各组大鼠生长曲线的影响示，，实验大鼠体重均呈增长状态，模型组生长最慢。与模生长曲线较稳定，体重变化不大；大剂量精氨酸甘草甜素酸甘草甜素盐小剂量组生长曲线较稳定。(见图 1)

相关蛋白,大鼠肝组织,纤维化,组图

组；7-②-模型组；7-③- Arginine 组；7-④-75mg/kg mg·kg-1 GLY-ARG 组；-ARG 组图 7 Western blot 法检测各组大鼠肝组织中纤维化相关蛋白的表达e expression of fibrosis related proteins in liver tissues of rats in each group Western blot
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】