甘草对重型颅脑损伤大鼠神经保护作用的研究

发布时间：2020-05-29 18:29

【摘要】：目的:通过建立大鼠重型颅脑损伤模型,观察大鼠血清白细胞介素(interleukin IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor TNF-α)、S100B蛋白含量的改变,以及大鼠脑组织神经生长因子(NGF)、BCL-2蛋白、BAX蛋白的表达,探讨甘草及甘草酸对重型颅脑损伤大鼠的神经保护作用。方法:将90只SPF级SD雄性大鼠随机分为5组:正常对照组、假手术组、模型非用药组、模型甘草水煎组、模型甘草酸组。每组各18只。建立大鼠重型颅脑损伤模型,造模成功后6h对各组大鼠进行神经功能缺损评分,甘草水煎组、甘草酸组分别予以2ml药物灌胃,正常对照组、假手术组、模型非用药组大鼠予以等量生理盐水灌胃,每日一次。各组分别于灌胃后24h、72h、168h三个时间段取材,每组取6只大鼠。取材时先心脏采血4?mL,采用酶联免疫吸附反应(ELISA)检测血清中IL-6、TNF-α、S100B蛋白含量;内固定后断头取脑,光镜下观察大鼠脑组织病理学改变,同时采用免疫组织化学法测定大鼠脑组织NGF、BCL-2蛋白、BAX蛋白表达。结果:(1)模型非用药组与正常组比较,在三个时间段神经功能缺损评分均明显升高(P0.05);甘草水煎组及甘草酸组在三个时间段神经功能缺损评分与模型非用药组比较明显降低(P0.05),但甘草水煎组及甘草酸组神经功能缺损评分在三个时间段比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)正常对照组、假手术组大鼠大脑脑组织细胞排列均匀,胞核染色为蓝色,呈椭圆形,可见核仁,轮廓清楚,未见神经细胞变性坏死及炎症细胞的浸润。模型非用药组可见细胞排列紊乱,细胞核固缩、碎裂明显,同时可见明显的组织细胞水肿及大量神经细胞坏死。甘草水煎组、甘草酸组大鼠脑组织疏松,细胞排列无序,神经细胞少见,少量的细胞核固缩、炎症细胞浸润,部分细胞水肿,胶质细胞增生。(3)除假手术组外,模型非用药组、甘草水煎组和甘草酸组在三个时间段血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量均较正常组明显增加(P0.05)。造模成功后24h,与正常对照组比较,模型非用药组大鼠血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量即出现升高,同时在72h达到高峰,168h有所回落,但仍高于正常对照组;给予中药甘草和甘草酸干预后,三个时间段大鼠血清IL-6、TNF-α、S100B蛋白的含量均低于模型非用药组,差异明显(P0.05)。但甘草水煎组和甘草酸在相同时间段比较,差异无统计学意义(P0.05)。(4)正常组和假手术组大鼠在脑组织中均有少量NGF表达,两组之间无差异(P0.05)。造模成功后24h,模型非用药组大鼠脑组织中NGF表达即增加,一直持续至168h,但三个时间段差异无统计学意义(P0.05)。甘草水煎组和甘草酸组在24h与模型非用药组比较NGF表达无差异,在第72h两组表达明显增加,差异显著(P0.05),在168h达到高峰,但两组之间差异无统计学意义。(5)除假手术组外,模型非用药组、甘草水煎组和甘草酸组在各个时间段BCL-2蛋白的表达均增高,差异明显(P0.05)。在模型非用药组中,在72h中表达稍有回落,但三个时间段的差异不明显(P0.05)。甘草水煎组在第24h即增加,并在168h达到高峰。甘草酸组在24h与模型非用药组表达无差异,但在72h开始表达增加,一直持续至168h(P0.05)。甘草水煎组和甘草酸组在24h大鼠脑组织BCL-2蛋白阳性细胞的表达无差异(P0.05),但在第72h、168h,甘草水煎组BCL-2蛋白阳性细胞表达明显增加(P0.05)。(6)正常组、假手术组大鼠脑组织均有少量BAX蛋白表达,两组之间差异无统计学意义(P0.05),模型非用药组、甘草水煎组和甘草酸组三个时间段BAX蛋白表达明显增高(P0.05)。造模成功后第24h模型非用药组大鼠即出现BAX蛋白表达,在72h达到高峰,在168h稍有回落。甘草水煎组和甘草酸组亦在72h出现高值,但较模型非用药组明显降低(P0.05),并且随着用药时间的延长在第168h明显降低(P0.05)。但甘草水煎组和甘草酸组内比较无差异(P0.05)结论:甘草及甘草酸对重型颅脑损伤大鼠均具有神经保护作用,其机制与降低继发性炎症反应、抑制细胞凋亡有关;与甘草酸相比,甘草的神经保护作用更明显,提示甘草中还有其他活性成分参与对受损神经细胞的保护作用。
【图文】：

甘草酸,甘草,光镜,模型

21图 1 HE 染色 200x 倍光镜大鼠脑组织病理表现：A：正常组；B：假手术组；C：模型非用药组 72h；D：甘草水煎组 72h；E：甘草酸组 72h；Figurel 1 HE staining×200,The result of brain tissue pathology examinations: A: normal control group;B:sham operation group;C: model group at 72h;D: The liquorice water decoction group at 72h;E: Theglycyrrhizic acid group at 72h.

甘草酸,甘草,大鼠,模型

25图 2 各组大鼠 NGF 表达比较（SP 法，Χ200 倍）：A：正常组；B：假手术组；C：模型非用药组 72hD：甘草水煎组 72h；E：甘草酸组 72h。Figurel 2 Immunohistochemical staining，×200,The result of brain tissue pathology examinations: Anormal control group;B: sham operation group;C: model group at 72h;D: The liquorice water decoctiogroup at 72h;E: The glycyrrhizic acid groupgroup at 72h.7 甘草和甘草酸在颅脑损伤大鼠脑组织 BCL-2 蛋白表达除假手术组外，模型非用药组、甘草水煎组和甘草酸组在各个时间段BCL-2 蛋白的表达均增高，差异明显（P<0.05）。在模型非用药组中，在 72表达稍有回落，，但三个时间段的差异不明显（P>0.05）。甘草水煎组在第 24即增加，并在 168h 达到高峰。甘草酸组在 24h 与模型非用药组表达无差异
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】